عنوان :
شناسايي و بررسي اثر باكتريوفاژهاي جدا شده از استخرهاي پرورش ماهيان قزل آلاي رنگين‌كمان استان كرمان بر باكتريهاي استرپتوكوك اينيايي، يرسينيا راكري و آئروموناس هيدروفيلا
شرح پديد آور/مجري (مجريان) طرح :
يزدانپناه گوهرريزي، لاله
شناسه هاي افزوده :
جليل ذريه‌زهرا، محمد ابراهيم ، همكارطرح , بخش زمين، فرخ رخ ، همكارطرح , امامي‌فر، محسن ، همكارطرح , آذرزمزم، محمدرضا ، همكارطرح , شاكري، پيروز ، همكارطرح
تنالگان :
وزارت ﺟﻬﺎد ﮐﺸﺎورزي - ﺳﺎزﻣﺎن ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت، آﻣﻮزش و ﺗﺮوﯾﺞﮐﺸﺎورزي - ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر
چكيده فارسي :
فاژ درماني، اخيرأ بعنوان يك جايگزين براي آنتي‌بيوتيك‌ها جهت غيرفعال كردن باكتريهاي بيماريزاي آبزيان پيشنهاد گرديده است، اما يافته‌هاي موجود هنوز ناكافي به نظر مي رسد. لذا هدف تحقيق حاضر، جداسازي باكتريوفاژي مؤثر بر باكتريهاي بيماريزاي ماهي قزل‌آلاي رنگين‌كمان بدون تأثير نامطلوب بر ساختار طبيعي آبزي است. بر اين اساس، به منظور جداسازي باكتريهاي بيماري‌زا ابتدا از بافت‌هاي كليه، كبد و طحال ماهيان بيمار و همچنين آب تعدادي از استخرهاي پرورش ماهي قزل‌آلاي رنگين‌كمان استان كرمان نمونه‌برداري و با انجام آزمايشات ميكروبشناسي، بيوشيميايي، افتراقي تشخيصي، پي‌سي‌آر و تعيين توالي ژن 16S rRNA و مقايسه با باكتريهاي استاندارد، شناسايي انجام شد. همزمان فاكتورهاي مهم شيميايي آب مانند اكسيژن، پي‌اچ، نيتريت، نيترات و آمونياك نيز اندازه‌گيري و ثبت گرديدند و رابطه آنها با رايج‌ترين عامل بيماري‌زا بررسي گرديد. همچنين نمونه‌هاي آب استخرهاي پرورش ماهي با استفاده از روش كلروفرم براي جداسازي باكتريوفاژ اختصاصي مورد استفاده قرار گرفتند و تأثير مهاري باكتريوفاژ جداسازي شده بر باكتريهاي مورد نظر در شرايط برون‌تني و درون‌تني انجام شد كه از رقت‌هاي 4-10 و 8-10 باكتري آئروموناس هيدروفيلا به‌صورت داخل صفاقي و غوطه‌وري و مواجه با غلظت ml/PFU 3-10 باكتريوفاژ استفاده گرديد. تجزيه و تحليل داده‌ها به كمك نرم‌افزار 21SPSS به روش آناليز واريانس يكطرفه انجام شد. ميانگين داده‌ها به كمك آزمون دانكن با يكديگر مقايسه شدند. همچنين دررسم نمودارها وجداول از نرم افزار اكسل 2007 استفاده شد. پس از كشت نمونه‌ها، باكتريهاي بيماريزاي آئروموناس هيدروفيلا، استرپتوكوكوس اينيايي و يرسينيا راكري جداسازي گرديدند. همچنين باكتريوفاژ AHɸ3 جداسازي شده توسط ميكروسكوپ الكتروني و پي‌سي‌آر شناسايي شد. نتايج بدست آمده از بررسي فاكتورهاي شيميايي آب نيز نشان داد كه با افزايش دما و كاهش اكسيژن ميزان نيتريت و آمونياك افزايش يافته و با بالا رفتن اين فاكتورها ماهيان مبتلا به بيماري آئرومونازيس نيز افزايش يافت. همچنين نتايج آزمون درون تني نشان داد بيشترين تاًثير باكتريوفاژ در ميزان بازماندگي ماهي قزل‌آلاي رنگين‌كمان زماني بود كه از رقت 8-10 باكتري وml/PFU 3-10 باكتريوفاژ AH3ɸ به‌صورت غوطه‌وري استفاده گرديد. در آزمون آماري، وجود يا فقدان اختلاف معني‌دار در سطح اطمينان 95 درصد (05/0P≤ ) تعيين شد. باكتريوفاژها به علت خاصيت‌هاي فراواني كه در تخريب انواع مختلف باكتري‌ها دارند، مي‌توانند به‌عنوان هدف‌هاي درماني در ساخت و توسعه داروهاي جديد در درمان عفونت‌هاي باكتريايي آبزيان مورد استفاده قرار گيرند. هر چند كه در مطالعات مختلف استفاده از فاژها به‌عنوان داروهاي جديد در محدودكردن رشد باكتريهاي عفوني از اولويت و اهميت بالايي برخوردار است، اما به‌نظر مي‌رسد در اين زمينه بايستي تحقيقات بيشتري صورت گيرد و تكنيك‌هاي توسعه‌يافته‌تري براي ارزيابي و طراحي فاژهاي جديد مورد استفاده قرار گيرد.
چكيده انگليسي :
Phage therapy has recently been suggested as an alternative to antibiotics to inactivate pathogenic aquatic bacteria, but the findings are still insufficient. Therefore, the aim of the present study was to isolate bacteriophage affecting pathogenic rainbow trout without adverse effect on aquatic structure. Accordingly, in order to isolate pathogenic bacteria from kidney, liver and spleen tissues of diseased fish and water, a number of rainbow trout ponds were sampled in Kerman province using microbiological, biochemical, differential diagnostic and PCR assays. Comparison with standard bacteria was performed. At the same time, important water chemical factors such as Oxygen, pH, Nitrite, Nitrate and Ammonia were measured and recorded and their relationship with the most common pathogen was investigated. Water samples of fish ponds were also used by chloroform method for specific bacteriophage isolation and the inhibitory effect of isolated bacteriophage on the in vitro and in vivo conditions was determined by dilution of Aeromonas hydrophila bacteria from 10-4 and 10-10. Intraperitoneal immersion and exposure to bacteriophage concentration of 10–3 PFU/ ml were used. Data were analyzed by SPSS 21 software using one-way analysis of variance. The data were compared by Duncan's test, with the presence or absence of significant difference at 95 percent confidence level (P =0.05). Excel 2007 software was also used for the charts. After cultivation, the pathogenic bacteria were isolated from Aeromonas hydrophila, Streptococcus inia and Yersinia ruckeri and bacteriophage AHɸ3. The results of water chemical analysis showed that Nitrite and Ammonia levels increased with increasing temperature and Oxygen reduction and fish with Aeromonasis disease increased with increasing of these factors. In vitro test results also showed that bacteriophage had the greatest effect on rainbow trout survival when dilution of 10-8 bacteria and 10-3 PFU/ml of AHɸ3 were used as immersion. Bacteriophages therapeutic can be used as targets in the development and new drugs in the treatment of aquatic bacterial infections due to their numerous properties in destroying different types of bacteria. Although the use of phage as a new drug is of high priority in various studies to limit the growth of infectious bacteria, further research and more advanced techniques for the evaluation and design of new phages should be considered.
كليدواژه :
آزمون‌هاي برون‌تني و درون‌تني , آئرومونازيس , باكتريوفاژ AH3ɸ , كنترل زيستي , ماهي قزل‌آلاي رنگين‌كمان
اطلاعات نشر :
تهران ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر
مشخصات ظاهري :
مصور، جدول، نمودار
فروست :
موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور 55219
