عنوان :
ايمن سازي ميگوهاي پرورشي در برابر بيماري لكه سفيد با استفاده از پروتئين هاي [نوتركيب] و تركيب توليدي و مطالعه آن در شرايط آزمايشگاهي
شرح پديد آور/مجري (مجريان) طرح :
هوشمند، حسين
شناسه هاي افزوده :
آهنگرزاده، مينا ، همكارطرح , مرتضايي، رضا ، همكارطرح , افشارنسب، محمد ، همكارطرح , محسني نژاد، لفته ، همكارطرح , سليماني، جمال ، همكارطرح , صيفي آباد شاپوري، مسعود رضا ، همكارطرح , شمسي، شكوفه ، همكارطرح
تنالگان :
وزارت ﺟﻬﺎد ﮐﺸﺎورزي - ﺳﺎزﻣﺎن ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت، آﻣﻮزش و ﺗﺮوﯾﺞﮐﺸﺎورزي - ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر
چكيده فارسي :
بروز بيماري‌هاي ميگو بالاخص بيماري‌هاي ويروسي از مهم‌ترين عوامل محدود كننده فعاليت‌هاي تكثير و پرورش ميگو در جهان مي‌باشد. بيماري ويروسي لكه سفيد يكي از مهلك‌ترين اين بيماري‌ها است كه موجب تلفات سنگيني در كليه ميگوهاي خانواده پنائيده مي‌شود. در ايران طي سال‌هاي 1381 و 1383 در استان خوزستان و سال 1384 در استان بوشهر اغلب استخرها و مزارع آلوده به بيماري لكه سفيد شده و كل صنعت پروش ميگو با خطر تعطيلي مواجه گرديد. با توجه به آنكه پروتئين هاي سطحي ويروس در مراحل اوليه برخورد ويروس با سلول هاي ميزبان (مراحل شناسايي سلول و نفوذ درآن) از نقش بسيار مهمي برخوردارند، معمولاً اين پروتئين ها بعنوان كانديدي براي ساخت واكسن هاي Subunit يا Recombinant محسوب مي شوند. از سوي ديگر اين پروتئين ها مي توانند بعنوان آنتي ژن هاي مهم ويروس در تهيه آنتي بادي ويژه ويروس و تهيه كيت هاي تشخيصي مورد استفاده قرار گيرند، در مطالعات متعدد استفاده از اين پروتئين ها بصورت تزريقي و يا درغالب واكسن خوراكي نتايج اميدواركننده اي را نشان داده است. اين مطالعه به منظور دستيابي به اين پروتئين ها جهت انجام ايمن سازي ميگو وانامي طراحي گرديد. براي دستيابي به ژنوم ويروس لكه سفيد از ميگوهاي بيمار و داراي علائم باليني مزارع پرورش ميگوي چوئبده آبادان نمونه برداري و استخراج DNA صورت گرفت. پرايمرهاي اختصاصي ژن‌هاي كد كننده پروتئين VP28 و VP19 انتخاب شدند و پس از تكثير و خالص سازي در باكتري TG1 كلون شدند. بيان پروتئين بررسي و پليت هاي تجاري توسط باكتري حاوي پروتئين نوتركيب غير فعال شده پوشانده شد. سپس پست لاروهاي مرحله 30 ميگوي سفيد غربي به مدت 7 روز با پليت هاي نوتركيب تغذيه شدند و دو بار در روزهاي 9 و 23 پس از شروع تغذيه با پليت هاي نوتركيب با ويروس لكه سفيد چالش شدند. نتايج آزمايش مواجهه اول (پايان روز هفتم پس از تغذيه ميگوها با پليت نوتركيب) نشان داد كه در پايان روز 14 پس از مواجهه كمترين درصد تلفات در گروه هاي مختلف مربوط به گروه VP28 برابر 84/3±30% و بالاترين درصد مربوط به گروه TG1 برابر 93/2±22/72% بود همچنين بالاترين و كمترين ميزان بازماندگي نسبي به ترتيب متعلق به گروه هاي VP28 (09/5 ± 29/60%) و TG1 (94/2 ± 41/4%) بود.
در مقايسه درصد تلفات و ميزان بازماندگي نسبي گروه هاي مختلف مشخص گرديد كه بين گروه VP28 با ساير گروه ها و همچنين گروه VP28+19 با ساير گروه ها اختلاف معني داري وجود دارد در حالي كه بين گروه هاي VP19، TG1 و pMal اختلاف معني داري وجود نداشت (P<0.05).
در آزمايش مواجهه دوم (21 روز پس از اتمام تغذيه با پليت نوتركيب) مشخص گرديد كه كمترين درصد تلفات در اين مرحله نيز در گروه هاي مختلف مربوط به گروه VP28 برابر 09/5±50% و بالاترين درصد مربوط به گروه TG1 برابر 22/2±55/75% بود همچنين بالاترين و كمترين ميزان بازماندگي نسبي به ترتيب متعلق به گروه هاي VP28 ( 83/6 ± 83/32%) و TG1 (98/2 ± 00/0%) بود. به عنوان يك نتيجه كلي مي توان اشاره نمود كه پروتئين نوتركيب VP28 به هر شكلي در اختيار ميگوها قرار گيرد قابليت ايجاد محافظت در برابر ويروس لكه سفيد را دارد و برعكس پروتئين نوتركيب VP19 داراي اين قابليت در اين تحقيق نبود. همچنين ميزان بازماندگي ارتباط مستقيم با مدت زمان حضور پروتئين نوتركيب در جيره غذايي دارد.
چكيده انگليسي :
Shrimp diseases, especially viral diseases are the major limiting factors of shrimp farming activities in the world. White spot disease is one of the most pernicious viral disease that lead to serious loss in all shrimps of penaeids family. In Iran during 2002 to 2004 in Khuzestan province and in 2005 in Bushehr province, the most ponds and farms infected with white spot and the entire industry faced threat of closure. Surface proteins of virus has important role in the early stages of virus with host cell interaction, because these proteins usually enumerated as a candidate to produce a subunit and recombinant vaccines. On the other hand, these proteins can use as an important virus antigen and produce virus-specific antibodies in the preparation of diagnostic kits. In several studies proteins in the form of injection or oral vaccine has shown promising results. This study was designed in order to gain these proteins for immunization of white leg shrimp. To achieve the white spot virus genome, sampling and DNA extraction of moribund shrimps with clinical signs was done from Choebdeh farms. VP28 and VP19 protein-coding gene-specific primers were selected, and after amplification and purification were cloned in E.coli TG1. Protein expression evaluated and commercial plates were coated with inactivated bacteria containing the recombinant protein. White leg shrimp post larvae (PL30) were fed with recombinant food for 7 days then two times in 9th and 23th day after beginning of plate feeding and was challenged by white spot disease virus.
The results of the first exposure (end of the seventh day after the shrimp fed with recombinant plate) showed that the lowest mortality at day 14 after exposure in different groups belong to VP28 group with cumulative mortality percent %30 ± 3.84 and the highest percentage of the Group TG1 equal to %72.22±2.93, also The highest and lowest relative percent survival, belong to the group of VP28 (60.29± 5.09%) and TG1 (4.41 ± 2.94%), respectively. In terms of mortality percent and relative percent survival, VP28 and VP 28+19 has significant difference with other groups while there was no significant difference between the groups VP19, TG1 and pMal.
In the second exposure experiment (21 days after end of plate feeding) results showed that the lowest cumulative mortality in different groups belong to VP28 (%50 ± 5.09) and the highest percentage was owned by Group TG1 equal to %75.55±2.22, also the highest and the lowest of relative percent survival belong to VP28 (%32.86± 6.83) and TG1 (%0.00 ± 2.98) groups respectively. Similar to the first experiment, VP28 showed significant differences in cumulative mortality and relative percentage of survival in contrast to other group.
As a general conclusion it can be noted that recombinant protein VP28 in any form that delivered to shrimp was able to protect shrimp against white spot virus. On the contrary VP19 has no this ability. The survival rate is directly related to the duration of the presence of recombinant protein in the diet.
كليدواژه :
شرايط آزمايشگاهي , ايمن سازي ميگوهاي پرورشي , بيماري لكه سفيد , پروتئين ها , تركيب توليدي
اطلاعات نشر :
تهران موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور
مشخصات ظاهري :
بخشي رنگي، جدول، مصور، نمودار
فروست :
موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور 46114
كتابنامه :
كتابنامه: ص. 56- 65
موضوع :
ميگو- پرورش و تكثير , ميگو- بيماري ها , ميگو- بيماري هاي ويروسي
