مرکز منطقه ای اطلاع رساني علوم و فناوري - طراحي كيت تشخيصي بيماري سرخجه به روش اليزاي غيرمستقيم جهت تشخيص ايمنوگلوبولينهاي G و M در سرم افراد و استفاده از آن در يك بررسي سرواپيدميولوژيكي در شيراز

چكيده :

بيماري سرخجه يكي از بيماريهاي بومي ايران است كه بطور بالقوه مي تواند منجر به نقايص شديد مادرزادي گردد. با اين حال در مورد وضعيت ايمني افراد در نقاط مختلف ايران اطلاعات جامعي در دست نيست . اين مطالعه با هدف طراحي يك سيستم اليزا به روش غيرمستقيم جهت تشخيص آنتي بادي هاي ضد روبلا در سرم انجام پذيرفت . بر اين اساس پش از كشت و تكثير ويروس در رده سلولي Vero آنتي ژن روبلا براساس روش Mitchell و همكاران (197-327) تهيه گرديده و در يك سيستم اليزاي غيرمستقيم بكار گرفته شد. وجود CPE به صورت سلولهاي گرد شده در كف فلاسك كشت ، وجود پلاكهاي حاصل از ويروس و وجود سلولهايي كه قادر به اتصال به گلبولهاي قرمز تر يپسينه شده انسان بودند شواهدي دال بر تكثير موفق ويروس را فراهمن مي كردند. از طريق پاساژ ويروس به صورت آلترناتيو برروي سلولهاي Vero , BHK-12 افزايش تيتر ويروسي به ميزان 32 برابر حاصل گرديد. با تزريق محيط كشت حاوي ويروس روبلا به خرگوش ، آنتي بادي پلي كلونال عليه روبلا تهيه گرديد. اين آنتي سرم قادر به شناسايي آنتي ژن كيت تجاري و آنتي ژن تهيه شده در آزمايشگاه بود. همچنين با طراحي يك سيستم اليزاي رقابتي مشخص گرديد كه آنتي بادي پلي كلونال قادر به رقابت با سرمهاي مثبت انساني در واكنش با آنتي ژن كيت تجاري Alfabiotech مي باشد. انجام Western- blotting, SDS-PAGE با سرمهاي انساني و سرم پلي كلونال خرگوش وجود باندهايي با وزن مولكولي مشابه با پروتيينهاي ويروسي را تاييد نمود.