رسوب دهي آنزيم كاتالاز از عصاره خام باكتري Kocuria ASB107 ، با به كارگيري روش دو مرحله اي Salting out

پراكسیدهیدروژن (H2O2) به عنوان اكسیدانتی بسیار قوی كه كاربردهای فراوانی در صنایع غذایی، بهداشتی ، نساجی و ...دارد، لازم است كه به سبب اثرات سمی آن در فرایندهای نهایی تولید صنعتی حذف شود. كاتالاز آنزیمی است كه H2O2 را تجزیه می كند. تولید آنزیم كاتالاز میكروبی می تواند به طور وسیعی در بخش های صنعتی مختلف مورد استفاده قرار گیرد. باكتری مقاوم به پرتوهای یونیزان Kocuria ASB 107 كه از چشمه رادیواكتیو رامسر جداسازی و شناسایی شده است، در اواخر فاز لگاریتمی قادر به تولید انبوه آنزیم كاتالاز با پایداری نسبی قابل توجهی می باشد، بنابراین كاندیدای مناسبی برای تولید صنعتی آنزیم كاتالاز می باشد. در این پژوهش برای تخلیص جزیی آنزیم كاتالاز از باكتری كوكوریا، بیومسی حاصل از رشد باكتری بر اثر شوك دمایی و تیمار با آنزیم لیزوزیم شكسته شد و عصاره سلولی آن توسط سانتریفوژ جدا گردید. عصاره ی خام حاصل، طی دو مرحله تحت رسوب دهی با سولفات آمونیوم (40% و ۶o60) قرار گرفت. فعالیت كاتالازی عصاره ی خام و محصولات پروتئینی حاصل از مراحل رسوب دهی با سولفات آمونیوم، با استفاده از اسپكتروفتومتری، بر مبنای میزان تجزیه ی H2O2 در طول موج 240nm ، مورد بررسی قرار گرفت. پس از محاسبه ی میزان پروتئین موجود در نمونه های مذكور، با استفاده از تست برادفورد، فعالیت ویژه و درجه ی تخلیص آنزیم كاتالاز در هر یك از مراحل تعیین گردید. نتایج حاصل بیان گر تخلیص 3/5 برابری آنزیم كاتالاز در رسوب حاصل از رسوب دهی با سولفات آمونیوم 60% است.

H2O2 is a powerful oxidant that is used as a bleaching or microbiocidal agent in the food, paper and textile industries. However, due to its toxicity to environment and human health, H2O2 needs to be eliminated after industrial process. Catalase is one of those enzymes that catalyze the decomposition of H2O2 into water and oxygen. Production of microbial catalase can be wildly used in the several parts of industry. Kocuria ASB107 is a radio-resistant bacterium that was screened and characterized from radioactive spring in Ramsar. This bacterium can produce too much catalase during last of logarithmic phase of its life. This catalase has considerable relative stability (such as temperature stability) that made Kocuria as a suitable candidate for commercial production of catalase. In this study, The bacterial culture was cultivated in TSA medium and resulted biomass was aggregated at the last of logaritm phase. The cells were cleaved by freez and thaw technic and 80 min incubation with lysosyme enzyme (5mg/ml) at 37°C. The supernatant was isolated by centrifugation .the pooled crude enzyme exteract was precipitated by adding ammonium sulfate during two steps ( 40% and 60% ). Catalase activity was measured spectrophotometrically by monitoring the decrease in absorbance at 240nm caused by decomposition of H2O2. The protein concentration was determined by the bradford method. Specific activity and purification fold were calculated for every steps. The result showed that the specific activity and purification fold of catalase increased during this process