جداسازي و همسانه سازي ژن لاكتوفرين و توليد نو تركيب آن در مخمر Pichia pastoris

هدف این پژوهش جداسازی و همسانه سازی ژن لاكتوفرین شتر و بیان آن در مخمر Pichia pastoris می باشد. در این پژوهش ژن لاكتوفرین از بافت پستانی شتر عربی جداسازی شده و در ناقل همسانه سازی pTZ57R/T وارد شد، بعد از تایید آن با توالی یابی، توالی ژن در ناقل بیان pHIL-S1 همسانه سازی شد و بعد از خطی شدن به روش الكتروپوراسیون به مخمر انتقال داده شد. بعد از انتخاب ترانسفرم ها، انتقال و قرار گیری ژن در ژنوم مخمر با واكنش PCR تایید شد. بیان پروتئین نیز با القا كشت مخمر با متانول انجام شد. بررسی فعالیت ضد میكروبی پروتئین تولید شده بر علیه باكتری گرم Escherichia coli PTCC 1330 و باكتری گرم مثبت Staphylococcus aureus PTCC 1112 انجام شد. هاله محدودیت دیسك های حاوی لاكتوفرین نشان داد كه پروتئین دارای فعالیت ضد باكتریایی می باشد.

The purpose of this study is isolation and cloning of camel lactoferrin gene and its recombinant production in Pichia pastoris. Lactoferrin gene is isolated from camel brest tissue and inserted in pTZ57R/T cloning vector. After conforming it by sequencing, it is cloned in pHIL-S1 expression vector, linearalised and transformed to yeast by electroporation method. After selection of transformant, integration of gene in yeast genome was confirmed by PCR. Protein expression is done by using methanol to induce yeast culture. Evaluation of antimicrobial activity of recombinant protein against gram negative bacteria Escherichia coli PTCC 1330, gram positive bacteria Staphylococcus aureus PTCC 1112 is performed. Inhibition zone of discs containing lactoferrin showed that the protein has antibacterial activity