جداسازي و همسانه سازي ژن ليپاز باسيلوس سابتيليس DR8806 در باكتري coliDH5 aE

Isolation and cloningof a lipase gene from Bacillus subtilis DR8806 in E.coli DH5a

در این تحقیق، باكتری DR8806Bacillus subtilis كه در مطالعات قبلی از چشمه آب گرم دیگ رستم جداسازی و با روش های مختلف شناسایی شده بود، به منظور استخراج DNA ژنومی مورد استفاده قرار گرفت. طراحی آغازگرهای اختصاصی ژن لیپاز با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیكی و بر اساسی تطبیق توالی ژن های كد كننده لیپاز در بانك اطلاعات NCBI انجام شد. با توجه به خصوصیات ژن مورد نظر و ویژگی های حامل، در دو انتهای یا آغازگرها دو جایگاه برش برای آنزیم های محدودالاثر HatilII و HindIII طراحی گردید. ژن لیپاز با تكنیك PCR تكثیر و در حامل همسانه سازی pTZ57R/T تحت كنترل پروموتر T7كلون گردید. پس از تأیید صحت كلونینگ توسط كلونی PCR و برش آنزیمی، پلاسمیدهای نوتركیب حامل ژن مورد نظر، جهت تعیین توالی مورد استفاده قرار گرفتند.

In this research, genomic DNA was prepared from Bacillus subtilisDR8806 which was previously isolated from Dig Rostam hot spring. Bioinformatic tools were used to design primers based upon multiple sequence alignment of lipase genes. Specific primers including BamH and Hind restriction sites were designed based on the properties of both the gene sequence and the vector map. The lipase gene was first amplified using PCR technique and then inserted into pTZ57R/T vector. Confirming the cloning accuracy via colony PCR and restriction analysis, recombinant plasmids containing desired gene were utilized for sequencing