توليد كشت سلولي اوليه از باله ماهي قزل آلا (Oncorhynchus mykiss) به كمك آنزيم تريپسين

Establishment of Primary Culture From Rainbow trout (Oncorhynchus mykis) by employing Enzymatic method

اين بررسي اولين گزارش از توليد كشت اوليه از ماهي به كمك آنزيم در كشور مي باشد. هدف از اين تحقيق بررسي امكان نگهداري كشت اوليه سلول هاي ماهي در شرايط آزمايشگاهي بوده است. به اين منظور از روش جداسازي آنزيمي توسط آنزيم تريپسين استفاده گرديد. باله ماهي قزل آلا پس از نخاعي شدن جدا شد و در محلول نمكي بالانس شده(PBS) حاوي آنتي بيوتيك به آزمايشگاه منتقل شد. بافت ها با PBS حاوي آنتي بيوتيك 5 الي 7 بار شسته شدند، سپس توسط ابزار استريل به قطعات كوچك خرد شدند. تكه هاي خرد شده به مدت 30 دقيقه همراه با آنزيم تريپسين %0.25 به همراه مگنت بر روي استيرر قرار داده شدند، سپس محلول رويي جدا گرديد و سلول ها به كمك سانتريفيوژ رسوب داده شدند و نهايتاً به درون فلاسك كشتcm 225 به همراه 5 ميلي ليتر محيط كشت Leibovitz-L15 حاوي %20 FBS ريخته شدند و به انكوباتور C˚20 منتقل گرديدند. محيط كشت اين سلول ها پس از 5 روز تعويض شد و پس از آن هر 4-3 روز يكبار نيمي از محيط كشت با محيط تازه جايگزين شد. اين سلول دو هفته در اين شرايط نگهداري شدند و رشد خوبي را نشان داده اند.

The aim of the current study was to establish primary cell culture from fish by employing enzymatic method. After sacrificing the fish, its fin was chopped off and moved in Phosphate buffer salin solution containing antibiotics to the laboratory. After several washes in PBS containing antibiotics, the disinfected tissue was cut into small pieces by sterile scissors. After that the tissue fragments moved to a container with sufficient amount of 0.25% trypsin solution and a magnet. Then put it on a stirrer for 30 minutes. The supernatant was removed and centrifuged to settle the suspension cells. The pellet resuspended in 1 ml of leibovitz L-15 with 20% FBS and seeded into a 25cm2 flask and 4 ml additional medium was added. The flask incubated at 20˚C for 5 days without interrupting the cells. After day 5 the whole medium was changed and afterward in 3-4 days intervals the half of medium was replaced with fresh medium. This cells have been cultured for 2 weeks