مقايسه دو روش جداسازي سلول هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان خرگوش

هدف: مقايسه بين دو روش شيب غلظتي فايكول و كشت مستقيم مغز استخوان به منظور جداسازي سلول هاي بنيادي مزانشيمي طرح مطالعه: مطالعه مقطعي حيوانات: در اين مطالعه از 10 قطعه خرگوش نر استفاده شد. روش كار: با استفاده از سوزن جمشيدي و سرنگ حاوي 5000 واحد هپارين انجام و در حدود 4 ميلي ليتر مغز استخوان اخذ شد و به دو گروه تقسيم شد. 5 /2 ميلي ليتر از مغز استخوان اخذ شده با 5 ميلي ليتر محيط DMEM حاوي حاوي 15 درصد FBS و 100 واحد پني سيلين و استرپتومايسين رقيق شد. محلول حاصل به مدت 3 دقيقه با RCF 200 سانتريفوژ شد. پليت سلولي با 1 ميلي ليتر محيط كشت، معلق و در يك فلاسك 75 سانتي متري كشت داده شد. سلول ها در دماي 37 درجه سانتي گراد و 5 درصد CO2 تحت انكوباسيون قرار گرفت. سه روز پس از آغاز كشت، محيط سلول ها تعويض شد و سپس هر 2 روز يك بار تعويض محيط كشت انجام گرفت. 5/ 2 ميلي ليتر از مغز استخوان اخذ شده بر روي 5 ميلي ليتر گراديان فايكول ريخته و به مدت 40 دقيقه با RCF 1200 سانتريفيوژ شد. سلول هاي معلق بر روي سطح لوله به ميزان 5 /1 ميلي ليتر برداشت شده، سپس سه بار با محيط كشت شستشو داده شد. پليت سلولي كف لوله با 1 ميلي ليتر محيط كشت، معلق و كشت داده شد. پس از آن تعويض محيط ها مشابه گروه قبل انجام شد. نتايج: در گروه گراديان فايكول از 10 نمونه مغز استخوان چهار نمونه داراي كلني مشخص بود و در گروه كشت مستقيم درتمامي فلاسك ها كلني تشكيل شد. اختلاف مشاهده شده بين دوگروه از نظر آماري معني دار بود. نتيجه گيري و كاربرد باليني: با توجه به نتايج حاضر، استفاده از روش كشت مستقيم سلول هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان خرگوش روشي كارآمدتر از جداسازي به روش گراديان فايكول مي باشد.