بررسي اثر پروبيوتيكي اسپور جدايه‌هاي باليني جنس باسيلوس روي رده سلولي سرطان راست روده Ht29/219

Study of probiotical effect of clinical isolates spore of the Bacillus genus on cell lineHT29/219

سرطان روده بزرگ پس از سرطان ريه در مكان دوم علل مرگ و مير ناشي از سرطان است مي‌باشد. پروبيوتيك‌ها باكتري‌هايي هستند كه از طريق حفظ تعادل ميكروبي روده تاثيرات سودمندي بر سلامت انسان‌ها دارند.بر اساس تحقيقات انجام شده استفاده از پروبيوتيك ها در كاهش خطر سرطان موثر است.هدف از اين تحقيق بررسي اثر پروبيوتيكي اسپورجدايه‌هاي باليني جنس باسيلوس روي رده سلولي سرطان كلونHt29/219مي‌باشد. جداسازي جنس باسيلوس از نمونه مدفوع با روش شوك حرارتي انجام گرديد.باكتري جداسازي شده با روش هاي استاندارد ميكروبيولوژيك شامل رنگ‌آميزي گرم آزمايش هايكاتالاز،SIM ، احياي نيترات ورنگ‌آميزي اسپور شناسايي گرديدند. همچنين به منظور پي بردن به خصوصيات پروبيوتيكي جدايه هاي باليني جنس باسيلوس ، آزمايش هاي متفاوت جدايه هاي با نمك Nacl ، مقاومت به اسيد و مقاوت به نمك هاي صفراوي انجام گرفت. در ادامه جنس باسيلوس ، از طريق واكنش PCR با پرايمر اختصاصي جنس باسيلوس مورد شناسايي و تاييدمولكولي قرار گرفتند. در پايان تعداد اسپورهاي 2 سويه باسيلوسN-14 و باسيلوسlichenforimsB-Sكه داراي خصوصيات پروبيوتيكي بالاتري بودند برروي رده ي سلولي Ht29/219 اثر داده شدند . به اين منظور اسپور اين جدايه ها با استفاده از لام نئوبار شمارش گرديد و ازهر كدام از اسپور سويه هارقت هاي 103 ، 105 ، 108 تهيه گرديد و در 5 زمان 0 ، 12 ، 24 ، 48 و 72 ساعت و در سه تكرار بر روي رده سلولي Ht29/219 اثر داده شدند و اثر اسپورجدايه هاي باليني جنس باسيلوس بر زنده ماني سلول هاي رده سلولي Ht29/219 طبق روش MTT assay مورد محاسبه قرار گرفت. :در اين تحقيق چهار جدايه باسيلوس از نمونه هاي مدفوع بدست آمد . اين جدايه ها با روش هاي ميكروبيولوژيك استاندارد ، شناسايي گرديد 2جدايه كه مقاوت بيشتري نسبت به اسيد ونمك هاي صفراوي داشته اندراانتخاب وجهت تاييد نهايي، واكنش PCR با پرايمر اختصاصي جنس باسيلوس انجام گرفت . نتايج اثر مهاري غلظت هاي متفاوت اسپور اين سويه ها بر روي رده سلولي Ht29/219 نشان داد كه جدايه جنس باسيلوسlichenforimsسويه B-Sدر زمان 72 ساعت در غلظت108 داراي بالاترين اثر مهاري مي باشد.نتيجه گيري : با توجه به نتايج بدست آمده ، پيشنهاد مي شود كه بتوان از اسپورجدايه هاي پروبيوتيكي جنس باسيلوس در توليد مكمل هاي غذايي پروبيوتيكي يا توليد فرآورده هاي بيولوژيكي در درمان سرطان كولون استفاده گردد .

Colon cancer after lung cancer is the second cause of deaths from cancer. Probiotics are bacteria through the intestinal microbial balance do have a beneficial impact on human health. The survey found the use of probiotics is effective in reducing the risk of cancer. The aim of this study was to investigate the effect of probiotic Bacillus clinical spore on colon cancer cell line Ht29 / 219 .Bacillus isolated from stool samples using heat shock. Bacteria isolated using standard microbiological tests include Gram stain Haykatalaz, SIM, reduction of nitrate and spores coloring were detected. In order to understand the properties of probiotic clinical isolates of Bacillus, the different isolates experiments with salt Nacl, resistance to acid and bile salts resistance was performed. Following the genus Bacillus, Bacillus genus by PCR with specific primers was identified and molecular confirmed. At the end of a strain of Bacillus spores 2 N-14 and higher probiotic Bacillus lichenforimsB-S that feature on cell lines Ht29 / 219 were granted. For this purpose spore isolates were counted using a Neubauer slide and every one of spore isolates Harqt of 103, 105, 108 prepared and 5 times 0, 12, 24, 48 and 72 hours in triplicate on line cell Ht29 / 219 Aspvrjdayh clinical effect and the effect of Bacillus living on alive cell line Ht29 / 219 MTT assay was calculated according to the method. In this study, four isolates were obtained from fecal samples. These isolates with standard microbiological methods were identified. 2 isolates were more resistant to acid and bile salt to the direction Andhra final approval, PCR reactions were performed with Bacillus genus-specific primers. Results inhibitory effect of different concentrations of spores of these strains on the cell line Ht29 / 219 indicated that the isolated Bacillus strain B-S lichenforims 72 hours at a concentration of 108 is the highest inhibitory effect. Based on these results, it is suggested that probiotics could Aspvrjdayh Bacillus probiotics dietary supplements in the production or manufacture of biological products used in the treatment of colon cancer.