بهينه سازي بيان هورمون رشد انساني با استفاده از روش القاي خودكار

Optimization of expression of human growth hormone by using autoinduction method

هورمون رشد انساني (hGH) يكي از مهم‌ترين هورمون‌هاي ترشح شده از غده هيپوفيز بوده‌ است. اين هورمون متشكل از 191 اسيد آمينه و داراي جرم مولكولي kDa 22 و همچنين داراي 4 ساختار هليكسي و دو پيوند دي سولفيدي است. [1,2] ايده القاي خودكار به عنوان راه مناسبي براي انجام توليد پروتئين نوتركيب بدون افزودن القاگر براي سيستم هاي بيان كنترل شده‌ي lac اپرون معرفي شد.[3] در اين پژوهش از باكتري E.coli و سويه Rosetta-gami حاوي pET32a(+)+hGH+Trx+His6 براي توليد پروتئين هدف به صورت محلول در سيتوپلاسم استفاده شد. بهينه سازي گلوكز، لاكتوز و گليسرول موجود در محيط خود القا با استفاده از طراحي آزمايش به روش سطح پاسخ توسط نرم افزار ديزاين اكسپرت بررسي گرديد. براي بررسي ميزان بيان پروتئين هدف از آناليز ژل الكتروفورز SDS-PAGE استفاده گرديد و تحليل ژل‌ها با استفاده از نرم افزار CLIQS صورت پذيرفت. در دماي 25 درجه سانتي‌گراد و در زمان 5/21 ساعت درصد بيان حدودا برابر با 40% و مقدار پروتئين توليدي برابر با mg/ml695/0 بوده است.

Human Growth Hormone (hGH) is one of the most important secreted hormones from the pituitary gland. The hormone consists of 191 amino acids with a molecular weight of kDa 22, and also has four helicoidal structures and two di-sulfide bonds. [1,2] The idea of ​​automated induction was introduced as a suitable way to carry out the production of recombinant protein without adding inductor for the controlled expression of the lac operon. [3] In this study, E.coli and Rosetta-gami strain containing pET32a (+) + hGH + Trx + His6 were used to produce target protein in solution in cytoplasm. The optimization of glucose, lactose and glycerol in their induction environment was investigated using the design of the test by response surface methodology by Designer Express. SDS-PAGE gel electrophoresis analysis was used to determine the target protein expression and gel analysis was performed using CLIQS software. At 25 ° C and at 21.5 hours, the expression was approximately 40% and the production value of the protein was 0.695 mg / ml.