بهينه سازي تركيب محيط كشت به منظور توليد پروتئين DT-GCSF با استفاده از باكتري نوتركيب اشريشياكلي در فلاسك لرزان

ايمونوتوكسين ها پروتئين هاي هيبريدي هدفمند، در راستاي درمان سرطان مي باشند، كه از دو بخش ايمني وتوكسيني تشكيل شده اند و به وسيله ي رابط هاي مشخصي به يكديگر متصل مي شوند DT-GCSF .متشكل از توكسين ديفتري و فاكتور محرك رشد گرانولوسيت GCSF انساني،جهت درمان لوكمياي ميلوئيد حادAML ) ( مي باشد. در اين تحقيق بهينه سازي تركيب محيط كشت پيچيده به منظور بيان ايمونوتوكسين DT-GCSF بررسي شده است.جهت بيان DT-GCSF از باكتري سويهBL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسميد نوتركيبpET21b استفاده گرديد. نوع محيط كشت ( Glucose LB+5g/l، SB،TB ) مقدار القاگر IPTG (05/0،1/0، mM 2/0 ( زمان القا (7/0 ، 2، 5/3) دماي القا (37 ،32 ، C °28) براي افزايش بيان در كشت فلاسك لرزان بر اساس روش تاگوجي بهينه سازي شده است. غلظت سلول بر اساس روش كدورت سنجي اندازه گيري شده و ميزان بيان پروتئين توسط الكتروفورز روي ژلSDS-PAGE مورد بررسي قرار گرفته است. طبق نتايج بدست آمده محيط كشت TB شامل : g/l ( 5/12 K2HPO4: ، 3/2: KH2PO4 ،24 Yeast extract:، 12 peptone: ، 5: Glycerol)به عنوان محيط كشت بهينه تعيين شد. بهترين زمان القاء توسط IPTG با غلظت mM05/0، در دمايC °37 در كدورت نوري 5/3=OD600nm تعيين شد . بيشترين مقدار توليد بيومس و بيان پروتئين هدف در محيط كشت بهينه‌سازي شده به ميزان. 3/6=OD600nm تعيين گرديد.