آناليز كمي ژن HAويروس آنفولانزاي انساني H1N1 با استفاده از روشPCR

بيمــاري آنفولانــزا يكــي از بيماريهــاي كشــنده در انســان و پرنــدگان مــي باشــد كــه بــه چنديــن همــه گيــري منجــر بــه مــرگ و ميــر بــالا انجاميــده اســت . آنتــي ژن نورآميــن ايــداز (NA) و آنتــي ژن هماگلوتينيــن (HA) مهــم تريــن زوجهــاي آنتــي ژنهــاي ســطحي ويــروس هســتند ، چراكــه آنهــا مشــمول نوتركيبــي و تغييــرات در طــي تحــولات ويــروس مــي باشــند . ايــن تحــولات ســبب چنديــن اپيدمــي و پاندمــي ويــروس آنفولانــزا تــا جايــي كــه امــكان دارد ، مــي شــود . يكــي از راههــاي ارزيابــي ســرعت ويــروس آنفولانــزا ، آناليــز كمــي ژنHA ويــروس آنفولانــزا بوســيله متــد زمــان واقعــي Real Time PCR( PCR) مــي باشــد . در ايــن مطالعــه آناليــز كمــي ژن HA ويــروس آنفولانــزاي انســاني H1N1 توســط متــد زمــان واقعــي PCR بهينــه ســازي گرديــد . PCR بــا اســتفاده از پرايمرهــاي طراحــي شــده بــراي قطعــه ژن HA انجــام شــد . قطعــه ژنHA بــه بــردار PTG-19 قــرار داده شــد و شــبيه ســازي بــا اســتفاده از روش تعييــن توالــي و هضــم توســط آنزيــم BamH1 تأييــد شــد . پلاســميد حــاوي ژن HAدر رقــت يــك دهــم تهيــه شــده و PCR كمــي بــر اســاس ســايبرگرين (SYBR Green) بــراي آنهــا انجــام شــد . پلاســميد حــاوي ژن HA ايجــاد گرديــد و در توالــي ســنجش ژن و هضــم آنزيمــي HA تأييــد شــده و توســط روش Real Time PCR بــر اســاس ســايبرگرين در رقــت هــاي مختلــف انجــام شــد ؛ تفــاوت CT بيــن دو رقــت ارزيابــي در حــدود 3.5 بــود . حساســيت از روش بهينــه ســازي شــده ،170 عــدد كپــي از DNAدر هــر واكنــش بــود . بــا بهينــه ســازي تجزيــه و تحليــل كمــي از انكــوژن HA توســط روش Real Time PCR بــر اســاس ســايبرگرين ، شــرايطي پديــد آمــد كــه امــكان ارزيابــي بيــان ژن HAدر نمونــه هــاي بالينــي و بنابرايــن در كشــتهاي ســلولي تحــت درمــان بــا داروهــاي كانديــد ويــروس آنفولانــزا حــادث گرديــد .