بهينه سازي استخراج پروتوپلاست از ميوه گوجه فرنگي (Solanum lycopersicum)

تهيــه و اســتخراج پروتوپلاســت از بافــت هــاي گياهــي بــه منظــور انجــام پــروژه هــاي اصلاحــي و مهندســي ژنتيــك در گياهــان حايــز اهميــت اســت. لــذا پژوهــش حاضــر بــا هــدف بهينــه ســازي شــرايط جداســازي پروتوپلاســت از ميــوه گوجــه فرنگــي انجــام شــد. چهــار تيمارمختلــف شــامل: آب،CPW (101 ميلــي گــرم در ليتــر KNO3،1480 ميلــي گــرم در ليتــر CaCl2.2H2O، 246 ميلــي گــرم در ليتــر MgSO4.7H2O،27/2 ميلــي گــرم در ليتــر KH2PO4و 0/16 ميلــي گــرم در ليتــر KI)،محيــط غذايــي MS، محلولTrisحــاوي غلظــت هــاي متفــاوت 15 ،10 و20 درصــد ســاكارز و حــاوي 10 ميلي گــرم در ميلي ليتــر آنزيــم پكتينــاز بــه عنــوان محلــول اســتخراج ارزيابــي شــدند. بــا اســتفاده از ايــن تيمارهــا پروتوپلاســت جداســازي شــد ليكــن زنــده مانــي پروتوپلاســت ها پــس از20 ســاعت در ايــن تيمارهــا كامــلا متفــاوت بــود. پروتوپلاســت هاي اســتخراج شــده بــا اســتفاده از محلــول هــاي اســتخراج آب، CPWو MSدر تمامــي غلظت هــاي ســاكارز پــس از20 ســاعت از بيــن رفتنــد، ولــي پروتوپلاســت هاي اســتخراج شــده بــا محلــول Tris حــاوي15 درصــد ســاكارزپس از20 ســاعت زنــده ماندنــد. از آنجــا كــه بــراي بيــان موقــت ژن در پروتوپلاســت نيــاز بــه نگهــداري پروتوپلاســت هــاي تيمــار شــده بــا DNA بــراي مدتــي بيــن 8-16 ســاعت اســت، روش جداســازي ســازي پروتوپلاســت ارائــه شــده در ايــن پژوهــش مــي توانــد مطالعــات بيــان موقــت ژن در پروتوپلاســت گوجــه فرنگــي را تســهيل كنــد.