كلون بيان، خالص سازي و تعيين ويژگيهاي بيوشيميايي، بيوفيزيكي آنزيم پروتئين دي سولفيد ايزومراز از باكتري باسيلوس سابتيليسDR8806

تاخوردگــي صحيــح پروتئينهــا يكــي از مهمتريــن عوامــل و مشــكلات در مســير ســاخت پروتئينهــاي نوتركيــب اســت. وجــود پيوندهــاي دي ســولفيدي يكــي از مهمتريــن عواملــي اســت كــه منجــر بــه تاخوردگــي نامناســب پروتئينهــا ميگــردد در حاليكــه تشــكيل پيوندهــاي دي ســولفيدي صحيــح بــراي فعاليــت بيولوژيــك بســياري از پروتئينهــا ضــروري اســت. پروتئيــن دي ســولفيد ايزومــراز اوليــن و مهمتريــن كاتاليســت تاخوردگــي پروتئينهــا اســت كــه كاهــش، اكســايش و ايزومريزاســيون پيوندهــاي دي ســولفيدي را كاتاليــز ميكنــد. در ايــن تحقيــق ژن كــد كنندهــي پروتئيــن دي ســولفيد ايزومــراز از ســويهاي از باســيلوس ســابتيليس كــه از چمشــه آبگــرم در كرمــان جداســازي شــده بــود، بــه صــورت فيــوز شــده بــا گلوتاتيــون s ترانســفراز درون وكتــورpGEX4t كلــون و در باكتــري اشريشــياكلاي TOP10 بيــان شــد. خالــص ســازي بــا اســتفاده از ســتون كروماتوگرافــيGST انجــام شــد و بعــد از جــدا شــدن تــگ فعاليــت مخصــوص آنزيــم u/mg1227 بــود. توالــي آنزيــم داراي يــك چارچــوب خوانــش بــا 618 جفــت بــاز بــود كــه 206 اســيدآمينه را كــد ميكنــد و از لحــاظ ســاختاري 5% متفــاوت تــر از تمامــي پروتئيــن هــاي تــا بــه حــال گــزارش شــده اســت. وزن مولكولــي آنزيــم خالــص شــده 23/26 كيلــو دالتــون بــود. فعاليــت آنزيــم در حضــور يونهــاي 2+Co و2 + Mnافزايــش يافــت در حاليكــه فعاليتــش در حضــور يونهــاي Ag+ و 2+Zn كاهــش يافــت. 2+Ba و 2+Ca هيــچ اثــري روي فعاليــت آنزيــم نداشــتند. بعضــي از مهاركنندههــاي شــناخته شــده بــراي پروتئيــن دي ســولفيد ايزومــراز آنزيــم را مهــار ميكردنــد و برخــي ديگــر اثــري بــر آن نداشــتند. آنزيــم در محدودهــي وســيعي از pH (4/5-10) و دمــا (20- 85 درجــه ســانتيگراد) فعــال بــود و بهينــه pH آن 5/5 و دمــاي بهينــه فعاليــت 65 درجــه بــود. تاكنــون گزارشــي مبنــي بــر وجــود پروتئيــن دي ســولفيد ايزومــراز بــا ويژگــي پايــداري در محــدوده ي وســيعي از pH و دمــا ارائــه نشــده اســت در نتيجــه ايــن آنزيــم ميتوانــد كاربردهــاي بالقــوه فراوانــي در صنايــع مربوطــه داشــته باشــد.