تخليص سازي و بيان پروتئينORF2 ويروس هپاتيت E در باكتري اشرشيا كولي

هپاتيــت E عامــل هپاتيــت حــاد در ميــان مــردم از گــروه هــاي ســني مختلــف اســت و ميــزان مــرگ و ميــر بالايــي را شــامل ميشــود بخصــوص در زنــان بــاردار كــه تــا 30% اعــلام شــده اســت ، بنابرايــن پيشــگيري اوليــه از عفونــت HEV ضــروري اســت. هــدف از ايــن مطالعــه بــه دســت آوردن پروتئيــن )ORF2( ، كــه ممكــن اســت يــك كانديــد مناســب بــراي واكســن هپاتيــت E در آينــده باشــد. ژن كوتــاه شــده orf2 ، اســيد آمينــه هــاي 112 تــا 660 از توالــي پروتئيــن كپســيد HEV بهينــه ســازي شــده و ســنتز شــده را، كــد گــزاري مــي كنــد. بعــد از القــا بــا ايزوپروپيــل-D-β- IPTG) thiogalactopyranoside( و بهينــه ســازي شــرايط احــراز، پروتئيــن هــدف بــه وضــوح مشــخص شــده و توســط كروماتوگرافــي كــي ليــت Ni)2+( پالايــش مــي شــود. پروتئيــن پالايــش شــده توســط الكتروفــورز ژل پلــي آكريــل آميــد ســولفات ســديم دودســيل و روش وســترن بــلات اســتفاده مــي شــود. نتايــج بــه دســت آمــده از بهينــه ســازي شــرايط احــراز، نشــان داد كــه، بالاتريــن احــراز پروتئيــن، بــا اضافــه كــردن IPTG در غلظــت نهايــي، بــه انــدازه يــك ميلــي متــر در 37 درجــه ســانتي گــراد در هــر چهــار ســاعت، بــه دســت آمــد. احــراز و پالايــش كــردن پروتئيــن ORF2 بــا SDS-PAGE و روش وســترن بــلات، خيلــي كوتــاه تــر شــد. آناليــز SDS-PAGE يــك پــروه پروتئينــي در حــدود 50 كيلــو دالتــون را نشــان داد. SDS-PAGE پروتئيــن خالــص نشــان داد كــه بالاتريــن مقــدار از پروتئيــن هــدف در بافــر شستشــو بــا ph 4/5 بــه دســت آمــد. عملكــرد پروتئيــن خالــص در حــدود 1 ميلــي گــرم بــر ليتــر بــود.