جداسازي و شناسايي سودوموناس هاي توليدكننده آنزيم پروتئاز مقاوم به حرارت AprX در شير خام

نگهداري شير خام در شرايط سرما باعث تغيير فلور ميكروبي شير به سمت باكتري هاي سرماگرا مي گردد. .سودوموناس ها سويه هاي غالب سرماگرا در شير خام هستند كه توانايي توليد آنزيم هاي پروتئاز مقاوم به حرارت را دارند. اين آنزيم ها از مهمترين عوامل تغيير طعم و مزه و ژله اي شدن محصولات لبني حرارت ديده به خصوص شير استريليزه مي باشند. مهم ترين پروتئازي كه تاكنون در اين زمينه شناسايي شده است پروتئاز AprX است. هدف از انجام تحقيق حاضر، جداسازي و شناسايي سودوموناس هاي توليدكننده آنزيم AprX در شير خام بود. بدين منظور تعداد 100 نمونه شير خام تهيه و بر روي محيط پليت كانت آگار حاوي 2 درصد شير پس چرخ كشت داده شد. جهت شناسايي باكتري هاي جنس سودوموناس، آزمون هاي بيوشيميايي بر روي ايزوله هاي پروتئوليتيك جداسازي شده، انجام گرديد. به منظور تشخيص وجود ژن aprX در سودوموناس هاي خالص سازي شده، PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي اين ژن انجام پذيرفت. جهت تشخيص توانايي توليد آنزيم پروتئاز مقاوم به حرارت توسط ايزوله هاي واجد ژن aprX در شير استريليزه، Casein zymography انجام شد. بر اساس نتايج Casein zymography، ايزوله هاي داراي بيشترين توانايي توليد پروتئاز AprX انتخاب و با تعيين توالي ژن هاي 16S rRNA و rpoD تعيين هويت شدند. در مجموع نتايج اين تحقيق نشان داد كه در بين سودوموناس هاي با توانايي توليد AprX، سودوموناس فلورسنس داراي بيشترين شيوع و بيشترين توانايي توليد پروتئاز مقاوم به حرارت بود.