دستيابي به دانش فني و ساخت كيت تشخيص سريع بيماري نكروز عصبي ويروسي Viral Nervous Necrosis) ماهيان با استفاده از روش ايمونو كروماتوگرافي

تشخيص سريع بيماري و حذف سريع ماهيان آلوده در مراحل اوليه بيماري امري ضروري براي كنترل موثر شيوع بيماري در محيط هاي محصور دريائي و نيز مزارع آبزي پروري است. هدف اساسي در اين تحقيق طراحي و تهيه يك روش سنجش به منظور تشخيص سريع و آسان نمونه هاي آلوده به ويروس (VNN)بود. در روش ايمنوكروماتوگرافي پادتن نشاندار شده با ذرات كلوئيدي طلا بر ساير نشانگرها ارجحيت دارد. ذرات طلا 30 نانومتري با غلظت هاي مناسبي از پادتن و در pH مشخصي پوشانيده شده و با آلبومين سرم گاوي پايدار گرديدند. سپس طراحي كيت ايمنوكروماتوگرافي براي تشخيص بتانوداويروس انجام شد. به اين منظور حجم هاي مختلف كونژوگه طلا-پادتن بر روي پد كونزوگه ريخته و سپس مقادير مختلف پلي كلونال آنتي بادي در خط تست قرار گرفت. همچنين به منظور تاييد و اطمينان از عملكرد كونزوگه طلا-پادتن، خط كنترل حاوي پادتن ثانويه بر عليه پادتن موشي در منطقه مورد نظر قرار گرفت. در نهايت اجزاي كيت تكميل و نمونه مغز كفال ماهيان مشكوك مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج نشان داد كه اين كيت قادر به شناسايي 103 بتانودايروس مي باشد. در مرحله نهايي 50 نمونه سوپرناتانت مغز ماهي كفال طلائي كه با استفاده از روش Real-time PCR و ايمونوهيستوشيمي، داراي تاييد آلودگي با استفاده از كيت مزبور مورد ارزيابي قرار گرفتند. بطور كلي حساسيت و ويژگي اين روش به ترتيب 64 و 100 درصد بود. صحت روش ايمونوكروماتوگرافي تقريبا با روش Real-time PCR و ايمونوهيستوشمي همخواني دارد و در تست هاي غربالگري اپيدميولوزيك مي تواند بسيارمفيد باشد.