رديابي مستقيم و غير مستقيم ويروس تريستزاي مركبات در شته سبز پنبه

Direct and indirect detection of Citrus tristeza virus in Aphis gossypii

در اين تحقيق، روش‌هاي مستقيم و غير مستقيم رديابي ويروس تريستزاي مركبات (Citrus tristeza virus, CTV) در شته سبز پنبه مورد ارزيابي قرار گرفت. به اين منظور، جدايه SD4 از كلكسيون ويروسي پژوهشكده مركبات و ميوه‌هاي نيمه‌گرمسيري به كار گرفته شد. در روش غيرمستقيم، آزمون گياه محك، تحت شرايط كنترل شده‌ي گلخانه انجام شد. سه ماه پس از انتقال، حضور ويروس در گياهان گيرنده بر اساس علايم تشخيص داده شد. حضور CTV در گياهان محك، با آزمون RT-PCR دو مرحله‌اي با جفت آغازگرهاي اختصاصي T36CPF/T36CPR بر اساسRNA استخراج شده به روش SDS-Potassium acetate مورد تاييد قرار گرفت. در تشخيص مستقيم ويروس از شته‌ها، از تكنيك‌هاي RT-PCR و RT-nested-PCR استفاده شد. نتيجه آزمون RT-PCR يك مرحله‌اي با RNA استخراج شده از شته‌ها به روش ترايزول و آغازگرهايT36CPF/T36CPF، باندهاي خفيفي به طول 672 جفت باز بود. اما با انجام مرحله دوم PCR، براساس فرآورده به دست آمده و با استفاده از جفت آغازگرهاي T36CPF/P25R، قطعات مشخص با اندازه 362 جفت باز حاصل گرديد.

In this research, direct and indirect methods for detection of Citrus tristeza virus (CTV) in cotton aphid were evaluated. In this case, SD4 isolate from the virus collection of citrus and subtropical fruits research center was used. In the indirect method, indicator plant test was carried out under controlled conditions. Three months after transmission; the persence of virus was detected according to the symptoms in the receptor plants. Infection of the indicator plants was also confirmed by two-step RT-PCR with a pair of T36CPF/T36CPR specific primers based on RNA extracted by SDS-Potassium acetate. Direct virus detection of aphids was performed by RT-PCR and RT-nested-PCR. One-step RT-PCR with RNA extracted from aphids by Trizol method and T36CPF/T36CPR primers resulted 672 bp weak bands. However, by performing the second stage of PCR, using T36CPF/P25R primers, 362 bp specific bands were obtained.