شماره ركورد كنفرانس :
4678
عنوان مقاله :
طراحي و ساخت يك وكتور بياني گياهي حاوي ژن TNFRSF1B رمز كننده اتانرسپت
پديدآورندگان :
باباخاني مهين Babakhani.mahin@gmail.com دانشجوي كارشناسي ارشد گروه اصلاح و بيوتكنولوژي گياهي، دانشكده كشاورزي، دانشگاه اروميه، اروميه , جعفري مراد M.jafari@urmia.ac.ir دانشيار گروه اصلاح و بيوتكنولوژي گياهي، دانشكده كشاورزي، دانشگاه اروميه، اروميه
كليدواژه :
اتانرسپت , سازه نوتركيب , سامانه گياهي , وكتور بياني
عنوان كنفرانس :
سومين كنگره بين المللي و پانزدهمين كنگره ملي علوم زراعت و اصلاح نباتات ايران
چكيده فارسي :
آرتريت روماتوئيد (RA) يك بيماري شايع التهابي سيستميك خود ايمني است و عامل نكروز توموري آلفا (TNF-α) نقش مهمي در ابتلا به RA دارد. اتانرسپت (ETN، نام تجاري Enbrel®) يكي از داروهاي ضد TNF است كه توسط فن آوري DNA نوتركيب در سلول هاي تخمدان هامستر چيني توليد مي شود. در سال هاي اخير، گياهان به عنوان يك سيستم بيان كننده جذاب براي توليد اقتصادي پروتئين هاي دارويي نوتركيب به طور گسترده اي مورد پذيرش قرار گرفته اند. در تحقيق حاضر، يك سازه بياني نوتركيب براي توليد كارآمد ETN در گياه توتون ساخته شد. ژن TNFRS1B بهينه سازي شده با كدون هاي ترجيحي توتون كه ETN را رمز مي كند، در وكتور بياني دوتايي pBI121 همسانه سازي شد. براي بيان سطح بالاي ژن TNFRS1B، پروموتر CaMV 35S با يك ناحيه تقويت كننده دوبل شده و همچنين ناحيه غيرترجمه شونده 5 ژن chalcone synthase در كاست ژني نيز استفاده شد. براي تسهيل خالص سازي از عصاره گياه با استفاده از كروماتوگرافي تمايلي، يك برچسب hexahistidine (His6 tag) در انتهاي C پروتئين ETN نيز قرار داده شد. همچنين جايگاه برش آنزيم پروتئازي TEV از ويروس جغجغه توتون (tobacco etch virus) به توالي His6 براي حذف برچسب از پروتئين نوتركيب نهايي، متصل شد. درستي ساختار سازه با استفاده از آناليزهاي PCR و برش آنزيمي تاييد شد. وكتور نوتركيب حاصل مي-تواند در مطالعات آينده براي بيان و توليد ETN در سامانه تنباكو استفاده شود.
