اثر انجماد با رقيق كننده هاي مختلف بر نسبت جنسيت اسپرم گاو هلشتاين با تكنيك Real-time qPCR

انجماد به همراه تلقيح مصنوعي گام سريع در بهبود ژنتيكي دام در سراسر جهان در طول هزاره گذشته برداشته است. در طي انجماد، خسارت به پروتئين و DNA كه ممكن است به مرگ سلولي منجر شود، ديده مي شود. از مهم ترين عوامل موثر در انجماد مني، محتوا و نوع رقيق كننده براي اسپرم قبل از انجماد مي باشد. با توجه به اينكه انجماد موجب تغيير در نسبت جنسي اسپرم مي شود، اين تغيير در نسبت جنسي ممكن است بدليل استفاده از رقيق كننده ها يا تحت تأثير پردازش و بسته بندي مني طي فرايند انجماد حاصل شود. رقيق كننده هاي مورد استفاده در اين پژوهش رقيق كننده پايه تريس با زرده تخم مرغ و آندرومد است. پژوهش حاضر به منظور بررسي اثر انجماد با استفاده از دو رقيق كننده تريس-زرده تخم مرغ و آندرومد بر نسبت اسپرماتوزوئيدهاي حامل كروموزوم X و Y انجام گرفت. پس از رقيق كردن نمونه ها، انجماد صورت گرفت، پس از طي 2 هفته، يخ گشايي انجام شد، به منظور شستشوي مني و حذف سلول هاي مرده از تكنيك Swim up استفاده شد، سپس از اسپرم بدست آمده از تكنيك Swim up، استخراج DNA به روش بهينه يافته نمكي انجام گرفت. پس از استخراج DNA، real-time PCR براي تكثير قطعات 90، 89، 79 جفت بازي به ترتيب براي ژن هاي PLP، SRY، PAR با استفاده از جفت آغازگرهاي اختصاصي انجام گرفت و آناليز آماري با استفاده از آزمون t-test انجام گرفت و نسبت جنسيت محاسبه شد كه نشان داد، انجماد مني با استفاده از رقيق كننده تريس- زرده تخم مرغ منجر به افزايش معني دار ژن SRY و كاهش معني دار ژن PLP شد (05/0 P )، اما نتايج حاصل از افزودن آندرومد منجر به كاهش معني دار ژن SRY و افزايش معني دار ژن PLP شد (05/0 P ).