مطالعه اثر دي-2-اتيل هگزيل فتالات بر سلولهاي بنيادي مزانشيم مغز استخوان رت

Study of di-2-ethylhexyl phthalate effect on bone marrow mesenchymal stem cells

دي2-اتيل هگزيل فتالات به عنوان يك آلاينده ي زيست محيطي در محصولات صنعتي متعددي استفاده مي شود كه استفاده از آنها مي تواند براي حيوانات مضر باشد. در اين مطالعه تجربي MSCs تحت شرايط استريل استخراج و در محيط كشت DMEM حاوي 15 درصد FBS و پني سيلين/ استرپتومايسين تا سه پاساژ كشت و سپس با غلظت هاي مختلف دي2-اتيل هگزيل فتالات (0/5، 1، 10، 50، 100، 500، 1000، 1500، 2000، 2500 ميكرو مولار) در زمان‌هاي 12، 24 و 48 ساعت تيمار شد. توانايي زيستي با روش تريپان بلو بررسي و در نهايت زمان 48 ساعت و دوزهاي 100، 500 و 1500 ميكرو مولار جهت ادامه ي مطالعه انتخاب شد. مورفولوژي سلول ها با رنگ آميزي هوخست و آكريدين اورانژ و توانايي تكثير نيز با تست هاي CFA وPDN مورد مطالعه قرار گرفت. بررسي داده‌ها نشان داد دوز 100ميكرومولار در هيچ يك از زمانها تغيير معني دار بر توانائي حيات نداشته است. كاهش معني دار توانايي حيات در مدت زمان 48 ساعت نسبت به گروه كنترل از دوز 500 ميكرو مولار مشاهده و تيمار سلولها با دوز 1500 بعد از 48 ساعت باعث كاهش 50 درصدي سلولها شد. تيمار سلولها با دوزهاي انتخاب شده در مدت زمان 48 ساعت باعث تغييرات مرفولوژيك كوچك شدن هسته از طرفي شامل چروكيدگي سيتوپلاسم شد. توانايي كلني زايي و دوبرابر شدگي جمعيت سلول نيز بصورت معني دار و وابسته به دوز كاهش يافت. استفاده اين تركيب شيميائي باعث اثرات نامطلوبي بر سلوهاي بنيادي مي گردد.

Di-2- ethylhexyl phthalate as a pollutant is used in many industrial products and can be harmful to humans. In this experimental study, MSCs were extracted under sterile conditions and cultured in DMEM medium containing 15% FBS and penicillin / streptomycin to 3rd passages and then were treated with different concentrations of D-2-ethylhexyl phthalate (0/5, 1, 10, 50, 100 , 500, 1000, 1500, 2000, 2500μM) for 12, 24 and 48 h . Cell viability assay was evaluated by trypan blue method and finally, 48 hours and 100, 500 and 1500 μM dosages were selected to continue the study. The morphology of the cells was studied by hoechst and acridine orange staining, and the proliferation ability was also studied by CFA and PDN tests. Data analysis showed that 100 μm did not have a significant change in viability at any time. Significant decrease in viability was observed at 500 μM concentration of DEHP compare with the control group during 48 h, also 50% reduction in cell′s number was observed in cells treated with 1500μM of DEHP after 48 h .The selected doses of DEHP showd morphological changes such as the nuclear shrinkages and cytoplasmic wrinkles at 48 h. The colony forming ability and population doubling number of the treated cells decreased significantly in a dose dependent manner. As the result showed, using DEHP could have undesirable effects on stem cell.