جداسازي و همسانه سازي ژن مولد پيلوس سيستم ترشحي نوع 3 باكتري زانتوموناس آكسنوپوديس پاتووار سيتري

مركبات يكي از مهم ترين محصولات كشاورزي و داراي اهميت اقتصادي در ايران هستند. از جمله مهم ترين بيماري هاي مركبات در ايران بيماري شانكر باكتريايي مركبات مي باشد كه توسط باكتري زانتوموناس آكسنوپوديس پاتووار سيتري ايجاد مي شود. اين باكتري داراي پاتووارها و تيپ هاي مختلفي مي باشد كه هريك ازآنها فرم خاصي از شانكر مركبات را ايجاد مي كنند. سويه ي A* از باكتري Xac تنها بر روي ليمو ترش اثر داردو از ايران، عمان، عربستان سعودي و هند گزارش شده است. اين بيماري سبب ايجاد زخم هايي بر روي برگ، ساقه وميوه ي درختان مركبات مي شود و در نهايت ميوه هايي ايجاد مي شود كه بازار پسندي چنداني ندارند. بيشتر باكتري هاي بيماري زاي گياهي داراي سيستم ترشحي تيپ ΙΙΙ مي باشند كه به وسيله ي خوشه ي ژني hrp، به طول 23kb كد مي شود. اين سيستم براي ايجاد بيماري در گياهان ميزبان و ايجاد پاسخ هاي فوق حساسيت در گياهان مقاوم لازم است. اين سيستم داراي يك ساختار رشته اي خارج سلولي به نام پيلوس است كه مانند يك مجزا پروتئين هاي باكتريايي را به داخل سيتوزول سلول گياهي وارد مي كند. جزء اصلي پيلوس، پروتئين HrpE است كه به وسيله ي قطعه ي ژني hrpE كد مي شود. هدف از تحقيق حاضر جداسازي و همسانه سازي ژن hrpE مي باشد. براي اين منظور ابتدا ترادف كد كننده ي ژن مذكور از منابع بانك ژن استخراج گرديده و پرايمرهاي اختصاصي مربوطه براي جداسازي آن طراحي گرديد. جداسازي و تكثير ژن مربوطه با روش PCR صورت گرفته و به منظور توليد انبوه پروتئين نوتركيب، همسانه سازي در وكتور بياني صورت پذيرفت. تاييدمراحل جداسازي و همسانه سازي با استفاده از روش هاي تكميلي مولكولي و تعيين ترادف انجام پذيرفت.