بهينه سازي شرايط انجام RT-PCR به منظور ارزيابي كمي بيان ژنهاي آنالوگ خانواده NBS-LRR در مركبات آلوده به عامل ميوه سبز مركبات

بيماري ميوه سبز مركبات با Huanglogbing (HLB) از خطرناكترين و ويرانكنندهترين بيماريهاي مركبات است اين بيماري در سال 1386 از جنوب ايران گزارش گرديد. در حال حاضر استراتژي كارآمد براي كنترل اين بيماري استفاده از گياهان مقاوم و متحمل به اين پاتوژنها ميباشد. بيشتر پروتين هاي رمز شده توسط ژنهاي مقاومت متعلق به خانواده (Nucleotide Binding Site Leucien-Rich Repeats : NBS LRR) مي باشد. امروزه مجموعه قابل توجهي از توالي هاي NBS-LRR حفاظت شده در گونه هاي مختلف گياهي در دسترس مي باشند. در اين مطالعه با استفاده از توالي هاي موجود از NBS-LRR در مركبات براي طراحي پرايمرهاي دجنره به منظور مطالعه كمي بيان ژنهاي خانواده NBS-LRR در مركبات آلوده به بيماري ميوه سبز مركبات استفاهه سد. پارامترهاي مختلفي از جمله دماي اتصال پرامير به الگو، غلظت پرايمر، غلظت كلريد منيزيوم و تعداد چرخه، جهت بهينه سازي شرايط PCR براي اين ژنها، تغيير يافت. نتايج بررسي نشان مي دهد از ميان چهار جفت پرايمر دجنره طراحي شده براي ارزيابي كمي بيان ژنهاي خانواده NBS-LRR در مركبات آلوده به بيماري ميوه سبز مركبات، تنها جفت آغازگر F11/R18 پس از 34 چرخه RT-PCR و در دمايي بين 52/3 تا 59/6 درجه سانتي گراد، به صورت مشخص ديده شد، غلظت پرايمر F11/R18 در RT-PCR در محدوده 0/8 - 0/2 ماكرومول اختلاف معني داري را نشان نداد ولي براي ژن كنترل داخلي 18S rRNA در غلظت 0/8 باند واضح تري مشاهده شد. بررسي هاي ما نشان مي دهد F11/R18 براي مطالعه ارزيابي كمي بيان ژنهاي خانواده NBS-LRR در مركبات آلوده به عامل ميوه سبز مركبات مناسب است. اين اولين گزارش از كاربرد يك پرايمر دجنره در مطالعه الگوي بيان ژنها در گياهان مي باشد.