شماره ركورد كنفرانس :
4522
عنوان مقاله :
ارزيابي و مزرعه اي و بررسي مولكولي ارقام مقاوم و حساس توتون نسبت به بيماري ويروس سيب زميني (PVY) با استفاده از نشانگرهاي ريز ماهواره (SSP).
پديدآورندگان :
شازده احمدي مرضيه محقق، مركز تحقيقات و آموزش توتون تيرتاشف بخش بيوتكنولوژي، بهشهر، مازندران , صلواتي ميبدي محمدرضا معاون پژوهشي، مركز تحقيقات و آموزش توتون تيرتاش، بهشهر، مازندران
كليدواژه :
توتون , بالك , ماركرهاي PVY , SSR
عنوان كنفرانس :
هشتمين همايش بيوتكنولوژي جمهوري اسلامي ايران و چهارمين همايش ملي امنيت زيستي
چكيده فارسي :
توتون يكي از گياهان مهم زراعي است كه در اقتصاد و درآمد كشورهاي توليد كننده نقش بسيار مهمي دارد. بيماري PVY يكي از مهمترين بيماري هاي ويروسي خسارت زا بر روي توتون است و باعث كاهش كميت و كيفيت محصول توتون مي گردد. يكي از موثرترين روشها براي كاهش خسارت اين ويروس، اصلاح ارقام مقاوم يا متحمل نسبت به اين ويروس است. نشانگرهاي DNA پيوسته با ژن هاي مقاومت و داراي چندشكلي زياد، مانند نشانگرهاي SSP مي توانند در تسريع برنامه هاي اصلاح ارقام مقاوم مفيد باشند. شناسايي ژن هاي مقاومت به PVY در توتون، كمك بسيار زيادي به توليد ارقام مقاوم مي نمايد. اين تحقيق به منظور ارزيابي مزرعه اي و بررسي مولكولي ارقام مقاوم و حساس توتون نسبت به بيماري ويروس Y سيب زميني با استفاده از نشانگرهاي SSP اجرا شد. جهت اجراي اين تحقيق، VAM مقاوم به PVY با رقم K326 حساس به اين بيماري با هم تلاقي داده شد. ابتدا تلاقي اوليه انجام شد، در سال بعد بذور F1 كشت شده و بذور F2 به دست آمده بود. بذور F3 موجود در بخش بيوتكنولوژي، حاصل از تلاقي رقم K326xVAM در اسفندماه 1389 در زانه بذرپاشي گرديد و نشاهاي حاصل در ارديبهشت ماه 1390 در مزرعه تحقيقاتي مركز تحقيقات و آموزش توتون تيرتاش نشا شدند. عمليات زراعي لازم به موقع انجام پذيرفت و ارزيابي مزرعه اي (مورفولوژيكي) از بين گياهان كشت شده در مزرعه تحقيقاتي تيرتاش صورت گرفت. سپس، گياهان F2 به دست آمده با جدايه خالص سازي شده سويه 0 ويروس PVY مايه زني شدند. در ادامه كارف براساس علايم مزرعه اي، از تعداد 10 بوته مقاوم و 10 بوته حساس، نمونه ي برگ تهيه گرديد. سپس، بر روي اين نمونه ها تست الايزا انجام شد و براساس نتايج تست الايزا، ژنوتيپ هاي حساس و مقاوم شناسايي شدند. DNAي مربوط به بوته هاي حساس و مقاوم به بيماري PVY، به طور جداگانه استخراج شدند و جهت تهيه نمونه هاي بالك حساس، DNA نمونه هاي حساس با همديگر مخلوط شده و جهت تهيه نمونه هاي بالك مقاوم ، DNA نمونه هاي مقاوم با همديگر مخلوط شدند. در ادامه كار، 100 ماركر SSR توتون بر روي DNA والد مقاوم و والد حساس به PVY به طور جداگانه تست شدند و بعد از انجام الكتروفورز عمودي و رنگ آميزي ژل با محلول نيترات نقره، از بين آنها ، 28 جفت آغازگر SSR توتون توانستند الگوي نواربندي متفاوتي را براي هر ماركر در بين والدين مقاوم و حساس به PVY، نشان دهند. در مرحله بعد، اين 28 ماركر بر روي بالك مقاوم و بالك حساس بيماري PVY، مورد آزمون قرار گرفتند. در نهايت مشخص گرديد كه 3 ماركر SSR توتون به نامهاي (PT20357)،(PT20165)،(PT30002) داراي بيشترين چند شكلي بر روي بالك هاي مقاوم و حساس توتون نسبت به بيماري PVY، بودند و مي توانند به عنوان نشانگرهاي SSR پيوسته به ژن مقاومت به بيماري pvy در توتون مدنظر قرار گيرند.
