بيان و تعيين خصوصيات پروتئين كوتاه شده نوتركيب NMP22مشابه پروتئين طبيعي به عنوان ماركر مناسب جهت تشخيص سرطان مثانه

مقدمه: سرطان مثانه يكي از انواع بدخيمي هاي مجاري ادراري است كه شيوع آن در مردان 4 برابر بيشتر از زنان مي باشدو تشخيص زود هنگام آن دردرمان موثر و كنترل بيماري نقش بسزايي دارد. روش هاي تشخيصي كه براساس شناسايي آنتي ژن هاي محلول رها شده در نمونه ادرار هستند مي توانند جايگزين روش هاي شناسايي تهاجمي شده و همچنين ميزان اختصاصيت و حساسيت بالاتري از خود نشان دهند. NMP22 بخشي از پروتئين هاي اسكلت هسته اي مي باشد كه پس از آپوپتوز سلول ، به ادرار رها شده و غلظت آن در ادرار افراد مبتلا به سرطان مثانه 20 تا 80 برابر بيشتر از نمونه هاي افراد سالم مي باشد. در اين مطالعه پروتئين نو تركيب NMP22 داراي نواحي آنتي ژنتيك به منظور ايجاد پاسخ ايمني در مدل حيواني طراحي، بيان و تخليص شد. مواد و روش ها: توالي ژنتيكي پروتئين مورد نظر از پايگاه اطلاعاتي Genbank برداشته شد و نواحي اپيتوپي آن براساس مقالات و هم چنين با استفاده از پايگاه هاي اطلاعاتي پروتئين انتخاب شده و300 اسيد آمينه انتخابي براي بيان در ميزبان E.coli سويه BL21 بهينه شده و براي سنتز به شركت Genscript سفارش داده شد. اين قطعه در وكتور بياني pGS21a داراي دنباله هيستيديني دريافت شد و به باكتري مستعد BL21 انتقال داده شد. پس از بيان، پروتئين مورد نظر برروي ژل SDS-PAGE مورد بررسي قرارگرفت. وسترن بلاتينگ جهت تاييد بيان و همچنين الايزا جهت بررسي واكنش با آنتي بادي تجاري انجام شد.يافته ها: پروتئين مورد نظر به خوبي بيان شده و باند61 كيلو دالتوني با استفاده ازSDS-PAGE مشاهده شد در حاليكه نمونه هاي القا نشده و باكتري بدون پلاسميد فاقد باند در ناحيه مورد نظر بود. وسترن بلاتينگ با استفاده از Anti-his tag بيان پروتئين را تاييد كرد. الايزا نيز واكنش اختصاصي آنتي ژن و آنتي بادي تجاري Anti-NMP22 را در مقابل نمونه كنترل منفي نشان داد. نتيجه گيري: پرتئين نوتركيب NMP22 مي تواند به عنوان يك كانديد مناسب جهت طراحي ابزار تشخيصي براي سرطان مثانه با استفاده از نمونه ادرار مورد استفاده قرار بگيرد.