تهيه وكتور مناسب براي انتقال ژن SOS3 به گياه ذرت

شوري خاك از مهمترين عوامل كاهش دهنده عملكرد گياهان و توليد محصولات كشاورزي مي باشد. بيان بيشينه ژنهاي دخيل در مسيرهاي مقاومت در برابر شوري، از قبيل مسير تنظيم هموستازي يوني SOS، يكي از مهمترين و موثرترين روشها براي افزايش مقاومت گياه مي باشد ژن SOS3 يكي از ژن هاي كليدي در اين مسير تنظيمي بوده و در اصل باعث فعال سازي اين مسير مي شود. از آنجا كه ذرت يك گياه نسبتاً حساس به شوري بوده و شوري خاك از مهمترين عوامل محدود كننده توليد ذرت در حال حاضر و آينده بشمار مي رود، لذا توليد ذرت هاي تراريخت با بيان بيشينه اين قبيل ژن ها مي تواند از كاهش عملكرد و سطح كشت اين گياه استراتژيك در آينده جلوگيري كند. باتوجه به اينكه وجود وكتورهاي بيان مناسب براي انتقال پايدار ژن هدف در گياه ذرت از عوامل ضروري مي باشد، لذا در اين پروژه به طراحي و ساخت وكتور بيان مناسب براي انتقال پايدار ژن SOS3 به گياه ذرت با روش تفنگ ژني پرداخته شد. براي اين منظور، ابتدا مناسبترين استراتژي براي كلون كردن cDNAي ژن SOS3 كه قبلاً در آزمايشگاه بيوتكنولوژي دانشگاه شهيد مدني آذربايجان جداسازي و در وكتور pGBKT7 كلون گرديده بود، طراحي و پس از چندين مرحله كار عملي، وكتور بيان مناسب براي انتقال آن به گياه ذرت تهيه گرديد. در مرحله اول، ژن SOS3 از وكتور pGBKT7 جداسازي و در وكتور pMA4 در بين پروموتر CaMV35S و ترميناتور Tnos كلون گرديد. وكتور حاصل pER1 نامگذاري شد. سپس ژن گزينشگر manA كه كدكننده فسفومانوز ايزومراز است، بعنوان ژن گزينشگر از وكتور pMA5 جداسازي و در وكتور pER1 كلون شد. وكتور حاصل pER2 نامگذاري شد كه مي توند براي انتقال ژن به ذرت و ساير گياهان فاقد ژن manA با استفاده از روش ريزپرتابي ، مورد استفاده قرار گيرد.