جدسازي و آزمون عملكرد راه انداز اختصاصي آندوسپرم زيرواحد با وزن ملكولي پايين گلوتنين گندم

بسياري از برنامه هاي كاربردي مهندسي ژنتيك گياهي نيازمند بيان مكاني مي باشد كه اين امر به راه اندازهاي اختصاصي وابسته است. از اينرو شناسايي و جداسازي راه اندازهاي قدرتمند اختصاصي همواره مورد توجه بوده است. در اين راستا راه انداز اختصاصي آندوسپرم زيرواحد با وزن ملكولي پائين گلوتنين گندم كه اختصاص درصد عمده گلوتنين به محصول ژن تحت بيان آن (%70-60) گوياي قدرت بالاي اين راه انداز است، انتخاب گرديد. DNA كل گندم در مرحله دو برگچهاي با استفاده از روش CTAB استخراج گشت . ناحيه راه انداز بوسيله PCR و با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي طراحي شده براساس بانك اطلاعات نوكلئوتيدي NCBI تكثير شد. قطعه هدف پس از اتصال به حامل همسانه سازي pGEM-T جهت تراريخته سازي سلولهاي مستعد باكتريايي به كار گرفته شد. پس از تائيد اوليه صحت درج قطعه در پلاسميدهاي استخراجي از باكتري هاي تراريخته، اطمينان نهايي از تكثير صحيح قطعه راه انداز طي بررسي نتايج توالييابي (شركت Bioneer كره جنوبي) حاصل گشت. راه انداز مذكور جهت بررسي فعاليت كاركردي آن در آندوسپرم، در حامل بياني pCAMBIA3301 درج شد. سازه امتزاجي حاصل با استفاده از تفنگ ژني به آندوسپرم و جنين بذور نارس گندم شليك شد. بيان موفق ژن در آندوسپرم به صورت لكه هاي آبي رنگ نمودار گرديد. در بافت هاي شاهد آلرون و جنين بيان رخ نداد. اين راه انداز مي توند به عنوان ابزار بيان اختصاصي در فرآيند تراريخته سازي گندم و احتمالاً ديگر غلات مورد استفاده قرار گيرد.