طراحي و ساخت وكتور مناسب براي انتقال ژن Ech42 به ذرت

قارچهاي بيماريزا همواره يكي از مهمترين عوامل خسارت به محصولات كشاورزي ميباشند. يكي از روشهاي مبارزه با بيماريهاي قارچي استفاده از مهندسي ژنتيكي براي انتقال ژنهاي رمزكننده آنزيمهاي هيدرولازي، خصوصاً كيتينازها به گياهان زارعي ميباشد . آنزيمهاي كيتينازي جدا شده از گونه هاي مختلف قارچ تريكودرما بويژه آنزيم Ech42 ، اثر بازدارندگي بالايي بر رشد قارچهاي بيمايزا داشته و بسيار موثرتر از كيتيهنازهاي جدا شده از منابع ديگر عمل مينمايد. ذرت يكي از مهمترين محصولات كشاورزي در جهان و ايران استف كه در معرض بيماريهاي مختلف قارچي قرار دارد. باتوجه به اهميت بازدارندگي زن Ech42 در رشد قارچهاي بيماريزا، بيان بيشينه اين ژن در ذرت مي تواند منجر به توليد ارقام مقاوم به بيماري ها شود. باتوجه به اينكه وجود وكتور مناسب براي انتقال موفق ژن به گياه ضروري ميباشد. در اين تحقيق به طراحي ساخت وكتور مناسب براي انتقال ژن Ech42 با كارايي بالا به گياه ذرت اقدام گرديد. براي اينكارف ابتدا cDNAي ژن Ech42 كه قبلاً از قارچ Trichoderma atroviride جداسازي و كلون شده بود، با استفاده از آنزيمهاي برشي XbaI و EcoRI در وكتور pMA4 و در بين پروموتور CaMV 35S و ترميناتور Tnos كلون گرديد. وكتور نوتركيب ساخته شده pTA1 نامگذاري شد در مرحله بعد، كاست بيان manA به عنوان مناسب ترين ژن گزينش گر در ذرت، با استفاده از NcoI و SacII از pMA5 جدا و در وكتور pTA1 كلون گرديد. وكتور ساخته شده (pTA2) براي انتقال Ech42 به گياه ذرت و نيز در گياه manA باشند، جهت ايجاد مقاومت به بيماريهاي قارچي، قابل استفاده خواهد بود.