ايجاد موتانت هاي فاقد فعاليت هسته يخ (INA-) در جدايه Xanthomonas translucens با استفاده Tn5

در طبيعت برگ هاي گياهان به وسيله تعدادي از باكتري ها پوشيده شده اند كه حضور اين باكتري ها سبب تشكيل يخ در دماهاي بسيار بالاتري نسبت به گياهان استريل مي گردد. امروزه به كمك زيست فناوري مي توان با تغيير در فلور ميكروبي منطقه كه شامل كاهش ميكروارگانيزم هاي مهم توزيع كننده ي هسته هاي يخي مي باشد، درجهت پيشگيري از سرما زدگي اقدام نمود. در اين روش با تخريب مستقيم يا غير مستقيم ژن عامل هسته يخ، جدايه هاي فاقد هسته يخ بدست مي آيند كه در همه صفات به جز قابليت تشكيل هسته يخ مشابه و ايزوژن جدايه ي والد داراي هسته يخ هستند و با تكثير وانتقال به روي گياه، با والد وحشي خود به رقابت مي پردازند. هدف از بررسي حاضر ايجاد موتانت هاي - INA در باكتري زانتوموناس ترنسلوسنس با هدف جلوگيري ازخسارت هاي فراوان ناشي از سرما زدگي مي باشد، در اين مطالعه از ترانسپوزون Tn5 و الكتروپوريشن براي ايجاد جهش استفاده گرديد. پس از القاء جهش كليه جدايه هاي موتانت حاصله و جدايه مادري، به منظور رديابي ژن هسته يخ( inaX) به كمك پرايمر طراحي شده وارد واكنش زنجيره اي پلي مراز شدند. جدايه مادري داراي ژن هسته يخ بود و بخش ژنومي مورد نظر را تكثير كرد اما جدايه هاي موتانت درآزمون ژنتيكي رديابي ژن ، اكثرا فاقدژن هسته يخ بودند و تغييرات چشمگيري در اين ژن نسبت به جدايه هاي مادري كسب كردند و با غير فعال شدن ژن ina فنوتيپ جهش يافته INA- را نشان دادند و در نهايت اين جدايه ها روي گياه لوبياحساس به سرما مورد ارزيابي قرار گرفتندو دو ايزوله به عنوان موتانت هاي فاقد هسته يخ (INA-) معرفي گرديدند.