طراحي ، كلونينگ و بيان داربوپوئتين در Leishmania tarentolae

زمينه و هدف: داربوپوئتين واريته مهندسي شده اي از اريتروپويتين مي باشد كه داراي دو جايگاه N- گليكوزيلاسيون اضافي در اسيد آمينه هاي 30 و 88 شده است. اين پروتئين تغيير يافته داراي نيمه عمر سرمي 3 برابر و فعاليت بيولوژيك بيشتر نسبت به اريتروپويتين بوده وهدف از اين تحقيق، افزايش بازده توليد داربوپوئتين بواسطه بيان در ليشمانيا تارانتولا (Leishmainiatarentolae) مي باشد. روش ها: ژن داربوپوئتين باكمك دانش بيوتكنولوژي مولكولي طراحي، بهينه سازي ازنظر توالي كدوني و سپس توسط استراتژي برش در وكتور بياني pLEXSY كلون گرديد. تاييد كلوني هاي ترانسفكت شده با استفاده از روش PCR با پرايمرهاي تشخيصي سازه بياني و پرايمرهاي مخصوص داربوپوئتين انجام گرفت. القاء ژن داربوپوئتين كلون شده توسط تتراسايكلين انجام شد و بيان ژن با دو تكنيك SDS-PAGE و وسترن بلاتينگ آناليز گرديد. نتايج: آناليز بيان ژن در سوش ترانسفكت شده توسط SDS-PAGE تاييدكننده ورود سازه ژني به كروموزم انگل و بيان داربوپوئتين بودند. بهترين شرايط بيان، 10 ميكروگرم تتراسايكلين و زمان القاء 72 ساعت بدست آمد. بحث و نتيجه گيري: در مجموع، سازه بياني جهت بيان ژن داربوپوئتين در ليشمانيا تارانتولا طراحي و ساخته شد و پروتئين مذكور با موفقيت القاء گرديد. هم اكنون مراحل بعدي پروژه به منظور ارزيابي عملكرد داربوپوئتين توليد شده در ميزبان انگلي در حال انجام مي باشد.