بيان استخراج، تخليص و بررسي ايمني زايي پروتئين نوتركيب زيرواحد تئانوتوكسين و جداسازي آنتي بادي پليكلونال عليه آن

زمينه وهدف: عامل بيماري مهلك كزاز توكسين كلستريديوم تتاني با وزن 150 كيلودالتون مي باشد. از گذشته تاكنون از توكسوئيد اين باكتري به عنوان واكسن استفاده مي شود. مهم ترين توكسين اين باكتري، تتانواسپاسمين شامل سه بخش اصلي زنجيره ، L، HN و HC مي باشد. دومين اتصال دهنده و ايمونوژنيك آن، بخش HC است و مي تواند به عنوان كانديد واكسن مطرح باشد. هدف از اين مطالعه طراحي و تهيه ژن صناعي جهش يافته اين بخش، توليد و تخليص و بررسي ايمن زايي پروتئين نوتركيب حاصل از آن و در نهايت تهيه سرم و آنتي بادي پليكلونال عليه آن مي باشد. روش بررسي: دراين مطالعه توصيفي- آزمايشگاهي پس از تعيين ترادف ژن دومين اتصال دهنده تتانو توكسين، ژن سنتتيك جهش يافته در وكتور بياني تهيه گرديده و تاييد آن به كمك PCR انجام شد. سپس اين سازه ژني به ميزبان E.Coli Bl21 DE3 منتقل شده و پس از فرايند بيان و تخليص پروتئين نوتركيب و تاييدباوسترنبلاتينگ، ايمني زايي در حيوان آزمايشگاهي صورت گرفت. درنهايت ضمن بررسي تيتر آنتي بادي، آنتي بادي پليكلونال عليه تتانوتوكسين از سرم جداسازي و تخليص گرديد. يافته ها: ژن صناعي زنجيره HC تتانوتوكسين تهيه شده در وكتور بياني pET28a مورد ارزيابي صحت قرارگرفت. پس از بيان و تخليص با ستون نيكل، نتايج وسترنبلات تاييد كننده پروتئين نوتركيب بود. ايمني زايي دو مدل موش و خرگوش نشان از تيتر بالاي آنتي بادي عليه پروتئين نوتركيب داشت. درنهايت جداسازي و تخليص آنتي بادي پليكلونال عليه تتانوتوكسين از سرم حيوانات ايمن به خوبي انجام گرديد. نتيجه گيري: توليد پروتئين نوتركيب بخش HC وبررسي ايمني زايي آن، نشان دهنده تيتر بالايي از آنتي بادي پليكلونال در سرم حيوان عليه تتانوتوكسين مي باشد.