توليد آنتي بادي هاي پلي كلونال عليه پروتئين هاي كدشده توسط ژن هاي ناحيه اختصاصي مردان در كروموزوم Y انسان

كروموزوم Y در انسان براي تمايز و شكل گيري بيضه و نيز اسپرماتوژنز ضروري است. بنابراين، بررسي بيان پروتئين هاي بيان شونده توسط اين كرموزوم در بافت هاي گوناگون به ويژه بافت بيضه از اهميت ويژه اي براي درمان بيماران مبتلا به ناهنجاري هاي مربوط به كروموزوم Y و نيز تعيين نقش احتمالي آنها برخوردار است. لازمه بررسي بيان و عملكرد پروتئين ها استفاده از آنتي بادي هاي باقدرت اتصال اختصاصي بالا مي باشد. از اين رو، اين طرح به توليد آنتي بادي هاي پليكلونال مناسب براي ژن هاي ناحيه اختصاصي مردان در كروموزوم Y اختصاص يافت. بدين منظور نواحي اختصاصي پروتئين ها با استفاده از نرم افزارهاي بيوانفورماتيكي جهت استفاده به عنوان آنتي ژن طراحي گرديد. سپس استخراج RNA و ساخت cDNA از بافت هاي بيضه، پروستات ولاين هاي سلولي انجام گرفت و پس ازكلون بخش هاي مربوطه بر روي وكتور بياني پروكاريوتي pET-28a، پروتئين نوتركيب آنها توليد و با استفاده از ستون هاي كرموتوگرافي خالص سازي شد. در نهايت پروتئين هاي خالص سازي شده پس از تاييد توسط روش طيف سنجي جرمي درفواصل زماني معين به خرگوش هاي نژادسفيد نيوزلندي تزريق و پس از اتمام اين ايمن سازي، عمل خونگيري و جداسازي سرم انجام گرفت. در پايان كيفيت آنتي بادي هاي توليدي با استفاده از روش هاي الايزا، ايمنو هيستو شيمي و وسترن بلات بررسي گرديد.