بررسي نقش سيگنال پپتيد PhoA بر بيان پري پلاسميك دسيرودين (هيرودين) در E.coli

هدف:با توجه به مزيت هاي دارويي هيرودين و ارجحيت آن به هپارين به عنوان داروي ضد انعقاد، توليد آن در كشور ضروريست. هيرودين پروتئيني با 65 تا 66 اسيد آمينه كه از غدد بزاقي زالو ترشح مي گردد و بازدارنده ي قوي ترومبين است. بيان بالاي هيرودين براي ميزبان ايكلي توكسيك بوده، لذا از سيستم هاي ترشحي استفاده شد. مواد و روش ها: ترادف 66 نوكلئوتيدي واريانت HV3 ژن هيرودين تهيه وبه يك وكتور بياني قوي (خانواده pET) انتقال داده شد. براي تسهيل در تخليص پروتئين از His-tag در انتهاي N ژن استفاده شد. سيگنال پپتيد PhoA در ابتداي ژن با هدف ترشح به فضاي پري پلاسميك و محيط كشت درج شد و بيان توسط سويه اي BL21(DE3)،اOrigamiB(DE3) اندازه گيري شد. در نهايت محصول توليدي در سيتوپلاسم، فضاي پري پلاسمي و محيط كشت اندازه گيري شد. نتايج و بحث: با روش SDS-PAGE، بيان پروتئين ديده شد و با وسترن بلاتينگ تاييد شد. بيان پروتئين در هر دو سويه تقريبا به يك اندازه بود. نتايج نشان داد مقدار پروتئين بيشتري در فضاي پري پلاسمي بيان شده و مقدار كمي پروتئين به محيط كشت نيز ترشح شد.