افزايش پايداري حرارتي ليپاز بومي ELBn12 با جهش زايي هدفمند

ليپازهاي مقاوم به حرارت كاربردهاي صنعتي مهمي دارند.از آنجاييكه آنزيم ها تمامي صفات كاربردي مطلوب را ندارند. مهندسي پروتئين مي تواند براي بهبود ويژگي هاي آنها استفاده شود. در اين مطالعه ليپاز ELBn12 كه از باكتري بومي Enterobacter sp. Bn12 جداسازي شده، براي جهش زايي منطقي مورد استفاده قرارگرفت. ساختار سوم ليپاز توسط نرم افزار Modeller پيش بيني شد. پلاسميد pET-26(b+) حاوي ژن ELBn12 ، به عنوان الگو استفاده شد وجهش Q177A با روش جهش زايي هدفمند اعمال ومحصول PCR در pET-26(b+) همسانه سازي گرديد. Escherichia coli Bl21(DE3)pLysS براي بيان استفاده شد. پس از خالص سازي، فعاليت ليپاز بصورت تيترامتري با سيستم pH-Stat اندازه گيري شد. پايداري حرارتي پس از گرماگذاري ليپاز در 60 Cº در طي يك ساعت بررسي گرديد. گلوتامين 177 روي يك لوپ سطحي درمدل پيش بيني شده قرار دارد. آناليز پايداري حرارتي نشان داد كه ليپاز ELBn1251% از فعاليت اوليه خود را پس از يك ساعت در Cº60 حفظ مي كنددرحاليكه ليپاز جهش يافته 78% از فعاليت خود را دارا است. اسيدهاي آمينه ناپايدار در دماي بالا مانند: آسپاراژين، گلوتامين و متيونين، در ليپازهاي مقاوم به حرارت كمتر وجود دارند، زيرا آنها در دماهاي بالا اكسيده و يا دآمينه مي شوند. نتايج اين بررسي هم نشان داد كه جهش Q177A پايداري حرارتي ليپاز طبيعي را افزايش مي دهد.