ارزيابي ژنوتيپي جدايه هاي كلستريديوم پرفرينجنس در خاك دامداري هاي استان كرمان

Genotypes of Clostridium Perfringens isolates in Farm soils in Kerman province

كلستريديوم پرفرينجنس يك باكتري گرم مثبت، بي هوازي، اسپور زا و غير متحرك است. اين باكتري در همه جا بخصوص در خاك حضور دارد. بيماريزايي آن ناشي از توليد 20 توكسين متفاوت است، اما الگوي تايپينگ باكتري بر مبناي توليد چهار توكسين اصلي آلفا، بتا، اپسيلون و يوتا مي باشد. هدف اين مطالعه ارزيابي تنوع ژنوتيپي جدايه هاي كلستريديوم پرفرينجنس در نمونه هاي خاك دامداريهاي با سابقه بيماري انتروتوكسمي مي باشد. تعداد 30 نمونه خاك از دامداريهاي استان كرمان بر مبناي گزارشات انتروتوكسمي سيستم GIS سازمان دامپزشكي جمع آوري گرديد. آماده سازي نمونه ها، كشت، جداسازي و ارزيابي باكتري شناسي جدايه هاي كلستريديوم پرفرينجنس بر اساس دستورالعمل Bergey’s انجام شد. ژنوتايپينگ جدايه ها با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن هاي آلفا، بتا، اپسيلون و يوتا در تكنيك PCR انجام شد. ميزان جداسازي باكتري كلستريديوم پرفرنجنس 33/23 درصد (7 از 30 نمونه) بود. تعداد 17 جدايه كلستريديوم پرفرينجنس بدست آمد كه در ارزيابي مولكولي، 2 جدايه تيپ A (مثبت براي ژن cpa)، 3 جدايه تيپ B (مثبت براي ژنهاي cpa، cpb و etx)، 5 جدايه تيپ C (مثبت براي ژنهاي cpa وcpb) و 7 جدايه تيپ D (مثبت براي ژنهاي cpa و etx) شناسايي گرديدند. شناسايي مولكولي كلستريديوم پرفرينجنس از خاك با تكنيك PCR براي اولين بار در ايران انجام شد و تيپ هاي B و C براي اولين بار از خاك دامداريهاي ايران جداسازي شدند. نتايج نشان داد خاك دامداريها مي تواند مخزن تيپ هاي بيماريزاي باكتري كلستريديوم پرفرينجنس باشد كه در چرخه مدفوعي-دهاني باكتري نقش ايفا كنند.

Clostridium perfringens is a gram-positive, anaerobic, spore-forming and non-motile bacterium spread throughout the environment, especially in soil. Its expressive toxicity is due to the ability to produce of 20 different protein toxins. The species C. perfringens was classified into five toxinotypes (A–E) according to the production of the alpha, beta, epsilon, or iota main toxins. The purpose of this study is the evaluation of C. Perfringens genotypes in livestock farm soils, which had historically enterotoxemia diseases. A total of 30 soil samples from different part of Kerman province were gathered based on GIS system reports. Preparation of samples, cultivation, isolation and bacteriological evaluation of C. perfringens isolates were performed based on Bergey’s manual protocols. Genotyping of isolates with specific primers for alpha, beta, epsilon and iota genes were performed by PCR. Isolation rate of C. perfringens was 23.33% (7/30). A total of 17 C. perfringens isolates were gained that were toxinotyped as: 2 isolates as type A (positive for cpa), 3 isolates as type B (positive for cpa, cpb and etx), 5 isolates as type C (positive for cpa and cpb), and 7 isolates as type D (positive for cpa and etx). Molecular identification of C. perfringens in soils was performed for the first time in Iran. C. perfringens types B and C were isolated from Iranian farm soils for the first time, too. The results showed that livestock soils could be a reservoir for toxigenic C. perfringens strains, which play a critical role in the fecal-oral bacterial cycle.