مطالعه چند شكلي ژن NRAMP1 و بيماري ورم پستان در گاوهاي هلشتاين ايران

Investigation of NRAMP1 gene polymorphism and mastitis disease in Iranian Holstein cows

مطالعه حاضر بر روي ارتباط تعداد سلولهاي سوماتيك در شير گاوهاي هلشتاين و ژنوتيپ مطلوب چندشكليهاي ناحيه‌اي از ژن NRAMP1 تمركز يافت. تعداد 120 راس گاو كه از جمعيت 4000 راسي گاو هلشتاين كه داراري شجره و ركورد بودند به صورت غير تصادفي (انتخاب 60 راس گاو از بين دام هاي داراي سابقه ورم پستان به عنوان گروه حساس و 60 راس گاو از بين دام هاي فاقد سابقه ورمپستان به عنوان گروه مقاوم) انتخاب شدند و نمونه‌هاي خون با استفاده از ونوجكتهاي 5 ميلي ليتري حاوي ماه ضد انعقاد EDTA از وريد دمي هر حيوان اخذ شد. استخراج و جداسازي DNA بر اساس ليزكردن سلولها و متعاقب آن، رسوب دادن DNA با دترجنت صورت گرفت. يك قطعه219 بازي شامل قسمتي ازناحيه اگزون شماره9 از جايگاه ژنيNRAMP1 به وسيله PCR تكثير شددر تمام نمونه‌هاي نژاد هلشتاين (دو گروه سالم‌ها و بيمارها) مورد بررسي، سه الگوي ژنوتيپي براي قطعه تكثير شده آشكار گرديد كه آزمون مربع كاي نشان داد كه بين فراواني‌هاي ژنوتيپي بين دو گروه داراي سابقه ورم‌پستان و بدون سابقه ورم‌پستان، اختلاف معني دار وجود دارد و جمعيت در تعادل هاردي واينبرگ قرار ندارد و فراواني ژنوتيپي CC، CG و GG در كل جمعيت به ترتيب برابر 0/35، 0/35، 0/30 برآورد شد. مقايسه فراواني هر الگو در دو گروه نشان داد كه در اين مدل آناليز ژنوتيپ معني‌دار بوده و آنچه كه در نتيجه اين آناليز مشهوداست كه آلل G باعث حساسيت به ورم پستان مي‌شود.

A study on the association the number of somatic cells (mastitis disease) in Holstein cows' milk and their association with the favorable genotype of regional polymorphisms of the NRAMP1 gene. Experiments were performed on DNA to determine the quality and quantity of agarose gel and Spectrophotometer. To reproduce a region of the NRAMP1 gene, using a pair of proprietary initiators consisting of a portion of the exon 9 region of the NRAMP1 gene site was amplified by PCR and then the RFLP method was used to identify the genotype. There is a significant relationship between the factors (risk factors for increasing the number of somatic cells) and the disease state (number of somatic cells) between parity and the condition of the disease (p <0/05). The analysis of the variance of normalized data showed that there is a significant relationship between somatic cell and parity (p <0.05). Bioanformatie technique by gel agarose electrophoresis of exone 9 of NRAMP1 declared 2 gene polymorphisms (G and C) and 3 genotypes (CC, GC, GG). The Allelic frequency and also CC genotype frequency were higher in healthy Cows than affected Cows, It means The cows with CC genotype had lower SCC as mastitis indicator.