جداسازي و شناسايي باكتري هاي مولد آنزيم هيالورونيداز و بهينه سازي توليد توسط روش آماري تاگوچي

Isolation and identification of bacteria producing hyaluronidase enzyme and optimization of production by Taguchi s statistical method

هيالورونيداز نوعي آنزيم گلوكوزيداز مي باشد و عامل شكسته شدن مولكول هاي اسيد هيالورونيك است. يكي از منابع توليد اين آنزيم باكتري ها هستند كه در اين تحقيق از منابع مختلفي از جمله نمونه هاي آب، خاك و هوا نمونه برداري شد. در مجموع 26 سويه توليد كننده آنزيم جدا سازي شدند. به منظور غربالگري سويه هاي توليد كننده اين آنزيم از محيط كشت BHI آگار استفاده شد. پس از اتوكلاو شدن به آن محلول سديم فسفات به همراه هيالورونيك اسيد و سرم آلبومين گاوي اضافه شد و در پليت ها توزيع گرديد. پس از بررسي هاي كمي، به بررسي كيفي آنزيم توليدي توسط روش كربازول پرداخته شد. در روش كربازول كه بر پايه ميزان جذب نوري مي باشد از دو محلول استفاده مي شود كه محلول شماره يك حاوي اسيد سولفوريك و سديم تتراهيدروبورات بود و محلول شماره دو حاوي اتانول و كربازول بود. پس از طي مراحل بررسي هاي كيفي 2 سويه كه بيشترين ميزان توليد آنزيم را داشتند انتخاب شدند و در نهايت توسط آزمون آماري چند فاكتوره تاگوچي منابع نيتروژن و منابع كربن مختلف و همزمان شرايط مختلفي مثل ميزان pHو دما بررسي گرديد و برهمكنش كليه ي شرايط گفته شده توسط نرم افزار بررسي و آزمايشاتي را نرم افزار به ما داد سپس با انجام آزمايشات و دريافت پاسخ آنها و انتقال به محيط نرم افزار، نرم افزار به ما نمودار هايي ارائه داد كه با بررسي اين نمودار ها به بيشترين ميزان توليد آنزيم رسيديم.

Hyaluronidase is a type of glucosidase enzyme and is responsible for breaking hyaluronic acid molecules. One of the sources of the production of this enzyme are bacteria, which were sampled from various sources such as water, soil and air samples in this research. A total of 26 enzyme producing strains were isolated. In order to screen the strains producing this enzyme, BHI agar culture medium was used. After autoclaving, sodium phosphate solution along with hyaluronic acid and bovine serum albumin was added to it and distributed in plates. After quantitative studies, the quality of the enzyme produced by the carbazole method was investigated. In the carbazole method, which is based on the amount of light absorption, two solutions are used, solution number one contains sulfuric acid and sodium tetrahydroborate, and solution number two contains ethanol and carbazole. After going through the stages of qualitative investigations, 2 strains that had the highest amount of enzyme production were selected, and finally, using Taguchi s multi-factorial statistical test, different nitrogen sources and different carbon sources and simultaneously different conditions such as pH and temperature were investigated and the interaction of all said conditions was investigated. Through the software, the software gave us some tests and tests, then by doing the tests and receiving their answers and transferring them to the software environment, the software presented us with graphs, and by checking these graphs, we reached the highest amount of enzyme production.