جداسازي ويروس‌هاي ميكروبي از درياچه اروميه: حفظ ذخاير ژنتيكي

Isolation of microbial viruses from Urmia Lake: Preserving genetic resources

ميكروارگانيسم هاي خاك براي چرخه مواد مغذي و حيات اكوسيستم ها ضروري هستند. بسياري از مطالعات نشان مي‌دهند كه ويروس‌ها نقش مهمي در تكامل ميزبان‌هاي باكتريايي خود دارند. درياچه اروميه سومين درياچه بزرگ آب شور ايران است كه در شمال غرب كشور قرار دارد. در سال هاي اخير به دليل خشكسالي و از بين رفتن بسياري از گونه هاي زيستي در اين درياچه، شناسايي و حفظ ذخاير ژنتيكي درياچه حياتي شده است. در اين تحقيق خاك و رسوب قسمت جنوبي درياچه جمع آوري و به آزمايشگاه منتقل شد. با استفاده از روش‌هاي وابسته به كشت، آركي‌ها، باكتري‌ها و فاژها جدا شدند. ميزبان هاي باكتريايي و آركي شناسايي شدند و ويروس هاي جدا شده از پلاك با ميكروسكوپ الكتروني گزاره (TEM) مشخص شدند. رقت هاي متوالي نمونه هاي خاك و رسوب بر روي محيط كشت SWN يا MGM 23 درصد كشت داده شدند. كلني هاي باكتري جدا و خالص شدند. شناسايي مولكولي ميكروارگانيسم هاي باكتريايي با توالي يابي 16S rRNA انجام شد. براي انجام سنجش پلاك، هاله ي ليز فيلتر شده به ميزبان تلقيح شد. پس از جداسازي پلاك، ويروس‌ها با روش لكه گذاري خالص شدند و آناليز مورفولوژيكي با رنگ‌آميزي منفي و ميكروسكوپ الكتروني گزاره انجام شد. تجزيه و تحليل مورفولوژيكي پيشنهاد مي‌كند كه ويروس به شبيه Myoviral و ويروس‌هاي پلئومورفيك است، در حاليكه ديگري مورفولوژي كروي با يك غشاي داخلي احاطه شده توسط كپسيد چند وجهي نشان داد.

Soil microorganisms are essential for the nutrient cycle and the life of ecosystems. Many studies show viruses play an important role in the evolution of their bacterial hosts. Urmia Lake is the third largest saline lake in Iran, located in the north-western part of the country. In recent years, due to drought and the loss of many biological species in this lake, the identification and conservation of the lake’s genetic resources have become critical. In this study, soil and sediment from the southern part of the lake were collected and transferred to the laboratory. Using culture-dependent approaches, archaea, bacteria, and phages were isolated. Bacterial and archaeal hosts were identified, and plaque-isolated viruses were characterized by transmission electron microscopy. Serial dilutions of soil and sediment samples were cultured on SWN or MGM 23% media. Bacterial colonies were isolated and purified. Molecular identification of bacterial microorganisms was performed by 16S rRNA sequencing. To perform a plaque assay, the filtered lysate was inoculated onto hosts. After plaque isolation, viruses were purified with a spot assay, and morphological analysis was performed by negative staining and transmission electron microscopy. The morphological analysis proposes that the virus is related to Myoviral like form and pleomorphic viruses while another showed spherical morphology with an inner membrane surrounded by an icosahedral capsid.