جداسازي سويه‌هاي متانوتروفي با استفاده از محيط‌هاي كشت مختلف

Isolation of methanotrophic strains using different culture media

متان، يكي از گازهاي گلخانه‌اي اتمسفري است كه نقش بسزايي در گرمايش جهاني و تغييرات آب و هوايي دارد. تخمين زده مي‌شود كه اين گاز، نسبت به دي‌اكسيد­كربن‌ تاثير چهار برابري اثر گلخانه‌اي دارد. متانوتروف‌ها دسته‌اي از باكتري‌ها هستند كه مي‌توانند بصورت هوازي يا بي‌هوازي روي منابع حاوي متان رشد كرده و طي فرآيند اكسيداسيون، اين گاز را به دي‌اكسيد كربن‌ تبديل كنند و به اين طريق نقش مهمي در كاهش غلظت گاز گلخانه‌اي متان دارند. هدف از اين مطالعه، مقايسه دو محيط كشت معدني مختلف براي كشت و جداسازي متانوتروف‌هاي بومي ايران بود. در اين مطالعه، از خاك پالايشگاه نفت بندرعباس براي جداسازي متانوتروف‌ها استفاده‌ شد. دو محيط‌هاي پايه انتخاب شده بترتيب حاوي نمك نيترات پتاسيم و نمك كلريد آمونيوم به عنوان تنها منبع نيتروژن بود. لازم به ذكر است محيط مورد اشاره حاوي 5/1% نمك كلريد سديم بود كه با گاز متان بعنوان تنها منبع كربن غني شده‌بود. نمونه خاك باروش رقيق سازي در محيط نمكي كشت داده‌شد. سپس از سوسپانسيون باكتريايي فوق، به محيط جامد انتقال داده‌شد تا كلني­هاي تك به­دست آيد. پس از واكشت‌هاي متعدد، هتروتروف‌هاي اقماري (Satellite heterotrophs) حذف شد. با توجه به تعداد كلني‌هاي رشد يافته، محيط كشت پايه نمكي حاوي نمك كلريد آمونيوم همراه با كلريد سديم 5/1% براي جداسازي پيشنهاد مي‌گردد.

Methane is one of the atmospheric greenhouse gases that plays a significant role in global warming and climate change. It is estimated that this gas has a greenhouse effect four times greater than that of carbon dioxide. Methanotrophs are a group of bacteria that can grow aerobically or anaerobically on methane-containing sources and convert this gas to carbon dioxide through oxidation processes, thereby playing an important role in reducing the atmospheric concentration of the greenhouse gas methane. The aim of this study was to compare the culture media in order to culture and isolate methanotrophic bacteria. In this study, soil from the Bandar Abbas oil refinery were used for the isolation of methanotrophs. The selected media contained potassium nitrate and ammonium chloride salts as nitrogen sources, respectively. It should be noted that 1.5% sodium chloride was added to the basal media. Afterwards, all types of media were enriched with methane as the only carbon source. The soil sample were cultured in the mentioned media using the dilution method. Subsequently, the resulting bacterial suspension was transferred to solid medium in order to achieve pure cultures for each. After multiple subcultures, satellite heterotrophs were eliminated. Based on the number of grown colonies, a saline basal medium containing ammonium chloride along with 1.5% sodium chloride is recommended for isolation