استفاده از وكتورهاي بيان مخمري جهت سنجش پروتئين هاي ترشحي موجودات عالي

پروتئين هاي ترشحي در بسياري از فرايندهاي زيستي نظير ريخت زايي، مرگ سلولي، تعديل پاسخ ايمني و در ميانكنش پاتوژنها و ميزبان نيز نقش اساسي دارند. اين پروتئينها ميتوانند نقش كاربردي در تشخيص و پيش آگهي سرطان داشته باشند و نيز به عنوان اهداف دارويي در درمان امراض استفاده شوند. همچنين اين پروتيينها در فرايند حمله به ميزبان و سركوب سيستم دفاعي ميزبان گياهي نقش اساسي دارند . تحقيقات ما در ازمايشگاه بر يافتن پروتيينهاي ترشحي برخي پاتوژنهاي گياهي مثل زنگ گندم و ني ز پروتيينهاي ترشحي سلولهاي سرطاني و يا بنيادي با استفاده از سيستم مخمري متمركز است. در اين سيستم ك ه در ان (Suc ناميده اند از مخمر موتاني استفاده ميشود كه ژن اينورتا ز ( 2 YST (Yeast Secretion Trap) جهش يافته و لذا قادر به رشد بر روي محيط واجد سوكروز به عنوان تنها منبع كربن نيست. تنها در صورتي اين كه سوكرز را به گلوكز و فروكتوز هيدروليز مي (Suc سلولها قادر به رشد خواهند شد كه بتوانند آنزيم اينورتاز -( 2 كند- را به فضاي خارج سلولي ترشح كنند. افزوده ميشود. به (Suc ي بافت يا ارگانيسم مورد نظر به انتهاي 5“ ژن اينورتاز( 2 cDNA ابتدا كتابخانه ژنهاي سلول مورد نظر در بالا دست ژن اينورتاز كلون شده و سپس اين cDNA اين ترتيب كتابخانه ايي از منتقل شده و بر روي محيط سوكروز كشت مي شوند . هر كدام از ، suc كتابخاته به جهش يافته هاي مخمري - 2 (signal peptid) كد كننده يك پروتئين ترشحي كه واجد توالي نشانه cDNA مخمرهاي ترانسفورم شده حاوي باشند توانايي ترشح اينورتاز نوتركيب را خواهند داشت كه سبب نجات مخمر جهش يافته حامل خود خواهد شد. 2 از مخمر تخليص شده و تعيين توالي صورت گرفته و پروتئين cDNA-Suc در نهايت پلاسميد حاوي ترشحي شناسايي مي گردد . -