تأثير حذف انتهاي آميني پروتئين OsMTI-Ib برنج در اتصال به يون نيكل

متالوتیونین ها پلی پپتیدهایی غنی از سیستئین بوده كه توسط خانواده ای از ژن ها كد می شوند. این پروتئین ها دارای وزن مولكولی كم (كمتر از ۱۰ كیلو دالتون) و با تمایل زیاد به فلزات می باشند، بنابراین در متابولیسم های سلولی فراوانی حائز اهمیت هستند. متالوتیونین های گیاهی خانوادهای از این پروتئینها می باشند كه به چهار زیر خانواده مجزا تقسیم میشوند، مطالعات قبلی تأیید كننده قابلیت اتصال پروتئین نوع PI متالوتیونین های گیاهی به فلزات دو ظرفیتی میباشد، ولی تاكنون قابلیت اتصالی هر دومین به صوت جداگانه در این گروه از پروتئینها بررسی نشده است. در این مطالعه به منظور بررسی جداگانه هر دومین، با حذف انتهای آمینی غنی از سیستئین در ژن OsMTI-Ib، پروتئین نوتركیب OsMTI-Ib كه حاوی انتهای كربوكسی می باشد، تولید شد. جهت مطالعه قابلیت اتصال پروتئین نوتركیب تولید شده به یوون نیكل در محیط in vitroبیان هترلوگ فرم نوتركیب C-OsMTI-Ibبا استفاده از ناقل بیانی pET41aو در میزبان باكتریایی E.coli سویه Rossetta(DE3)انجام گرفت. فرم طبیعی OsMTI-Ib نیز به عنوان سویه شاهد به همراه فرم C-OsMTI-Ib و به وسیله روش كروماتوگرافی تمایلی، خالص سازی شد. مقایسه های صورت گرفته، توسط ترسیم منحنی های رشد و سنجش طیف UV انجام شد. نتایج حاصل نشان دهنده عدم جذب نیكل توسط پروتئین نوع طبیعی، و جذب نسبی این فلز توسط پروتئین نوتركیب می باشد، كه می تواند بیانگر استقلال عملی انتهای كربوكسی در مورد تشكیل خوشه های تیولی و اتصال به فلز، و همچنین تاثیر فشردگی بیشتر بر پیچش و میانكنش هایی درون پروتئینی، در افزایش نسبی عملكرد این پروتئین باشد.

Metallothioneins(MT) are Cys-rich polypeptides that have been coded by a family of genes. These proteins have a low molecular weight (less than 10 KDa) and with high affinity to metals. So, they are important in many of cellular metabolism. Plant Metallothioneins are a family of these proteins that have division into four subfamilies. Previous study has shown P1 type of plant metallothionein have be able attachment to divalent metal ions, but ability of each domain to chelating metal not yet investigation. In this study to investigation on each domain, COsMTI- Ib recombinant protein that receptacle of C-terminal, produce by Nterminal deletion of OsMTI-Ib gene. To investigation of ability of recombinant protein binding to Nickel ion in invitro condition, Heterologous expression of COsMTI- Ib recombinant form hase done by pET41a expression vector into E. coli Rosetta (DE3) host strain. OsMTI-Ib natural form used as control strains, and with C-OsMTI-Ib Form, purified by affinity chromatography. Comparisons performed by growth curves and UV spectroscopy. The results indicate a lack of nickel uptake by natural type protein , and relative absorbed of the metal by recombinant protein. which can show the independence of the thiol clusters formation and bond to the metal in C-terminal, as well as the effect of more compression on the fold and interactions within the protein, lead to the relative increase in the protein function.