جداسازي و شناسايي يك پپتيد جديد آنتي‌اكسيدانتي از بتاكازئين شير شتر با پپسين و پانكراتين

Isolation and identification of a new antioxidant peptide from casein camelmilk using pepsin and pancreatin

زمينه و هدف: از آنجاكه آنتي‌اكسيدانت‌هاي سنتزي، داراي اثرات جانبي است، لذا استخراج آنتي‌اكسيدانت‌ها از منابع طبيعي فاقد اثرات جانبي مورد نياز است. هدف از اين تحقيق، شناسايي پپتيد حاصل از هيدروليز آنزيمي β-كازئين شير شتر با پپسين و پانكراتين است. مواد و روش‌ها: هيدروليز آنزيمي پروتئين β-كازئين شير شتر با استفاده از آنزيم‌هاي پپسين و پانكراتين انجام‌شد. سپس فركشن‌ها بااستفاده از RP-HPLCجداشدند و توالي پپتيد با استفاده از اسپكتروفتومتري MALD-TOFشناسايي‌شد. فعاليت آنتياكسيدانتي پپتيد جداشده با روش‌هاي جذب راديكال‌هاي DPPH، ABTS، هيدروكسيل و سوپراكسيد و مهار اكسيداسيون لينولئيك اسيد سنجش‌شد. يافته‌ها: نتايج تعيين توالي نشان‌داد كه پپتيد خالص‌شده با نام RQ-8 داراي توالي RGLHPVPQ و وزن ملكولي 903/41 دالتون است. اين پپتيد اكسيداسيون لينولئيك اسيد را، مهار و به‌عنوان جذب‌كننده‌ي راديكال 1،1- ديفنيل-2- پيكريل ـ هيدرازيل (DPPH)(IC50 = 0.046 mg/ml) و2،2-آزينو بيس(3-اتيل بنزوتيازولين 6- سلفونيك اسيد)(ABTS)(IC50 = 0.085 mg/ ml)، سوپراكسيد(O2º−)(IC50= 0.156 mg/ml)، و هيدروكسيل (OHº−) (IC50 = 0.021 mg/ml) عمل‌كرده است. علاوه برآن، سنجش‌هاي فعاليت سلولي نشان‌داد كه اين پپتيد RQ-8 شناسايي‌شده، هيچ سميّتي بر روي سلول‌هاي سرطاني ريهA549 ندارد. نتيجه‌گيري: اين نتايج نشان‌داد كه پپتيد RQ-8جداشده از پروتئين كازئين شير شتر، داراي فعاليت آنتي‌اكسيدانتي است.

Background & objective: Due to the side effects of synthetic antioxidants, bioactive agents derived from natural sources are of great importance. The purpose of this study was to identify and characterize an antioxidant peptide derived from enzymatic hydrolysis of β-casein in camel milk, using pepsin and pancreatin. Materials and Methods: Enzymatic hydrolysis of camel milk had accomplished using pepsin and pancreatin. The hydrolysate was fractioned using RP-HPLC and the peptide of interest was identified with MALD-TOF/TOF technique. Antioxidant activity of isolated peptide was measured by the use of radical scavenging DPPH, ABTS, hydroxyl and superoxide and inhibition of linoleic acid oxidation. Results: The results of sequencing showed that a purified peptide, called RQ-8, has the sequence of RGLHPVPQ with molecular weight of 903.41 Da. This peptide inhibited oxidation of linoleic acid and also had scavenging activity against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) (IC50=0.046 mg/ml), 2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazo-line-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS) (IC50 = 0.085 mg/ml), superoxide (O2·-) (IC50 = 0.156 mg/ml) and hydroxyl (OH ·-) (IC50 = 0.021 mg/ml) radicals. In addition, cellular activity assays showed that the RQ-8 peptide had no toxicity on A549 lung cancer cell line. Conclusion: Results indicated that the peptide RQ-8 isolated from camel milk β-casein protein has a strong antioxidant activity.