ارزيابي فعاليت ضدآميبي عصاره الكلي اسپند (Peganum harmala) روي آكانتاموبا در شرايط برون‌تني

Evaluation of Anti-amoebic Activity of Peganum harmala Ethanolic Extract on Acanthamoeba In vitro

زمينه و هدف: آكانتاموبا يك تك ياخته فرصت طلب بيماري­زاست كه با آلوده كردن قرنيه و ايجاد كراتيت چشم و سيستم اعصاب مركزي و ايجاد انسفاليت گرانولوماتوز كشنده شناخته شده است. هدف كلي مطالعه حاضر، تعيين پتانسيل ضد­آميبي تركيب طبيعي اسپند در مقابل تروفوزوئيت ها و كيست هاي آكانتاموبا در شرايط برون­تني بود. مواد و روش ­ها: در اين مطالعه تجربي، يك ايزوله باليني آكانتاموبا كشت و ژنوتايپ شد. عصاره اتانولي اسپند تهيه گرديد. تروفوزوئيت­ ها وكيست ها با شستشو در محلول سالين جمع آوري شدند. غلظت­ هاي مختلف (25/1 ، 5/2، 5 و 10 ميلي­گرم بر ميلي ليتر) از عصاره و قطره پلي هگزانايد 02/0 درصد به عنوان كنترل مثبت در سه زمان مختلف (24 ، 48 و 72 ساعت) روي تروفوزوئيت­ها و كيست­ هاي آكانتاموبا در شرايط برون­تني آزمايش شد. زنده ماندن تروفوزوئيت­ها وكيست­ها با روش ائوزين، MTT و فلوسايتومتري مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: نتايج نشان داد كه عصاره الكلي اثر مهاري قابل توجهي بر روي تكثير تروفوزوئيت­ها وكيست هاي آكانتاموبا نسبت به گروه شاهد بدون درمان داشته و مهاركنندگي وابسته به دوز و زمان بود. در حضور10 ميلي­گرم بر ميلي ليتر عصاره الكلي در محيط كشت پس از 72 ساعت، هيچ تروفوزوئيتي زنده نبود و 10/21 درصد ازكيست­ها زنده بودند. درصد زنده ماندن تروفوزوئيت ها و كيست ها بعد از اضافه كردن قطره پلي هگزانايد 02/0 درصد به محيط كشت پس از 72 ساعت به ترتيب صفر و 71/23 درصد بود. نتيجه­ گيري: عصاره الكلي اسپند مي تواند به عنوان يك تركيب طبيعي جديد در برابر تروفوزوئيت­ها و كيست هاي آكانتاموبا در نظر گرفته شود و تحقيقات بيشتر براي ارزيابي اثر دقيق اين عصاره بر عوامل آكانتاموبايي در مدل هاي حيواني لازم است.

Background: Acanthamoeba is an opportunistic protozoan pathogen that is known to infect the cornea to produce eye keratitis and the central nervous system to produce lethal granulomatous encephalitis. The overall aim of the present study was to determine the anti-amoebic potential of natural compound Peganum harmala against the trophozoites and cysts of Acanthamoeba in vitro. Materials and Methods: In this experimental study, a clinical isolate of Acanthamoeba was cultured and genotyped. The ethanolic extract of Peganum harmala was prepared. The trophozoites and cysts were collected by washing in page's saline. Various concentrations (1.25, 2.5, 5, and 10 mg/ml) of the ethanolic extract and polyhexanide 0.02% drop as positive control were tested at three different times (24, 48 and 72 h) on trophozoites and cysts of Acanthamoeba in vitro. The viability of trophozoites or cysts was tested by eozin method, MTT, and flowcytometry analysis. Results: The results revealed that alcoholic extract had remarkable inhibitory effect on the proliferation of Acanthamoeba cysts as compared to non-treated control, and the inhibition was time and dose dependent. In the presence of 10 mg/ml ethanolic extract in medium culture after 72 h, no viable trophozoites were determined and 21.10% cysts of Acanthamoeba were viable. Percentage of trophozoites and cysts viability after adding polyhexanide 0.02% drop in medium culture after 72 hours was 0% and 23.71%, respectively. Conclusion: Ethanolic extracts of Peganum harmala could be considered a new natural compound against the Acanthamoeba trophozoites and cysts. Further works are required to evaluate the exact effect of this extract on Acanthamoeba agents in animal models.