جداسازي و تخليص پروتئين پلاسمايي نوع A از سرم خانم‌هاي باردار در پايان سه ماهه سوم

Isolation and Purification of Plasma Protein-A from Pregnant Women Serum at The End of 3th Trimester

زمينه و هدف: پروتئين پلاسمايي مربوط به دوره بارداري نوع PAPP-A، گليكو پروتئيني است كه در طي بارداري در سلول‌ هاي سين‌ سيتيو‌تروفوبلاست جفت ساخته مي‌ شود و غلظت آن در سرم مادر همراه با پيشرفت مدت بارداري، افزايش مي‌ يابد. از آن جايي كه غلظت آن 28 روز پس از بارداري قابل اندازه‌گيري است. مقدار اين پروتئين تنها در خون مادران داراي جنين مبتلا به نشانگان داون در سه‌ ماهه اول بارداري در مقايسه با مادران داراي جنين طبيعي كاهش مي‌ يابد. لذا در اين پژوهش تخليص PAPP–A از سرم خانم‌ هاي باردار در آستانه زايمان صورت گرفته تا بتوان بر اين اساس، در پژوهش‌ هاي آتي روش ايمونولوژيكي مناسبي را براي اندازه‌ گيري غلظت اين پروتئين در سرم خانم‌ هاي باردار در سه ماهه‌ اول بارداري طراحي نمود. روش كار: جهت تخليص PAPP–A سه مرحله كروماتوگرافي كه به ترتيب شامل: ژل‌ فيلتراسيون به كمك ستون سفادكس، افينيتي‌كروماتوگرافي به كمك ستون هپارين‌‌-‌‌سفاروزو افينيتي‌ كروماتوگرافي‌ منفي به كمك ستون CNBr – activated sepharose 4B متصل‌شده به ايمونوگلوبولين‌هاي توليد شده بر‌ ضد پروتئين‌ هاي تام سرم انسان، بودند انجام گرفت. جهت تهيه ستون افينيتي‌كروماتوگرافي‌منفي نياز به تهيه ايمونوگلوبولين بر‌ضد پروتئين‌ هاي تام سرم انسان بود كه براي اين‌ منظور، ايمونيزاسيون خرگوش با سرم طبيعي انسان و سپس تخليص ايمونوگلوبولين توليد شده در‌طي دو مرحله متوالي افينيتي‌ كروماتوگرافي صورت‌ گرفت. پس از انجام مرحله سوم PAPP–A تخليص‌‌‌يافته حاصل گرديد. يافته ها: حجم مخلوط پروتئين هاي خانم‌ هاي باردار در آستانه زايمان در پيك‌ هاي اول، دوم، سوم و چهارم به ترتيب حدود 44، 40، 40 و 20 ميلي‌ليتر بود. نتيجه گيري: روش اتخاذ شده در اين پژوهش موجب به حداقل رساندن شرايط تخريب ساختمان PAPP – A مي‌ باشد.

Inroduction & Objective: Pregnancy associated plasma protein A (PAPP-A) is a glycoprotein that mainly is produced by the syncytiotrophoblast of human placenta throughout pregnancy and secreted in increasing amounts into the maternal serum as pregnancy progresses. Since PAPP-A level in maternal serum is measurable after 28th day of pregnancy and in the first trimester of pregnancies affected by fetal Down's syndrome, maternal serum concentrations of PAPP-A were found to be significantly lower than the level observed in normal pregnancies, it's level can be considered as a test for detection of early pregnancy and is a good marker for healthy of fetus.Material and Methods: So accordingly, future studies of immunological method suitable for measuring the concentration of the protein in the serum of pregnant women in trimester designed. After collection of late pregnancy sera, purification of PAPP-A was done by three step of chromatography procedure as: Gel filtration by column of Sephadex G200,Affinity chromatography by column of heparin-Sepharose, Negative affinity chromatography by CNBr-activated Sepharose 4B coupled to anti-total human serum proteins. Results: Then, immunoglobulin against purified PAPP-A was produced by immunization of rabbit with purified PAPP-A and purification of it was done by two step procedure of affinity chromatography. After the third stage of purification of PAPP-A was obtained.