اثر آنتي‌ ژن كارسينوامبريونيك‍‍ محلول بر تمايز سلولي ميوژنيك و انتروسيتيك

Effect of soluble Carcinoembryonic antigen on myogenic and enterocytic differentiation

سابقه و هدف: آنتي ژن كارسينوامبريونيك‍‍ (Carcinoembryonic antigen، CFA) يك گليكوپروتئين با لنگر Glycophosphatidyl inositol است كه بيان آن در بسياري از سرطان ها از جمله سرطان كولوركتال افزايش مي يابد. مهار تمايز سلول مي تواند باعث ايجاد سرطان شود. مطالعات پيشين نشان مي دهد كه ترانسفكشن و افزايش بيان CEA در كلونوسيت ها و ميوبلاست ها باعث مهار تمايز سلولي مي شود. در اين مطالعه، اثر آنتي ژن محلول CEA بر تمايز سلولي بررسي گرديد. مواد و روش ها: كشت هاي تك لايه سلول هاي Caco-2 ,L6 و C2C12 در محيط Dulbecco's Modification of Eagle's Medium (DMEM) حاوي %10 (FBS) Fetal Bovine Serum رشد داده شدند. به منظور القاء تمايز، محيط رده هاي سلولي C2C12 و L6 به DMEM حاوي 2% سرم اسب تغيير يافت. غلظت CEA در محيط كشت با روش الايزا اندازه گيري شد. رنگ آميزي هماتوكسيلين و ائوزين، اندازه گيري فعاليت كراتين كيناز (CK) و RT-PCR ژن ميوژنين براي آزمايشات تمايز C2C12 استفاده شد. يافته ها: نتايج نشان داد كه CEA خالص تجاري و محيط جمع آوري شده از سلول هاي LS-180 (حاوي مقادير بالاي CEA) بر تمايز سلول Caco-2 اثرات مهاري دارند، اما اين اثر در گروه هاي كنترل نيز ديده شد.ما مشاهده كرديم كه غلظت بالاي (CEA (5µg/ml و BSA (كنترل) اثرات يك ساني بر تمايز سلول هاي L6 دارند. تمايز سلول هاي C2C12 در سطح مورفولوژيكي و بيان ژن ميوژنين در پاسخ به اضافه كردن محيط كشت LS-180 مهار شد. فعاليت CK درگروه دريافت كننده محيط P=0.0012) LS-180) و P=0.0002) CHO) به طور معني داري از گروه كنترل كم تر بود. نتيجه گيري: نتايج ما نشان مي دهد كه آنتي ژن محلول CEA اثرات قابل توجهي بر روي تمايز سلولي ندارد

Introduction: Carcinoembryonic antigen (CEA), a glycophosphatidyl inositol (GPI) anchored glycoprotein, is over-expressed in various cancers, including colorectal carcinomas. Inhibition of cell differentiation can cause cancer. Previous studies show transfection and over-expression of CEA gene in myoblasts or colonocytes leads to inhibition of cell differentiation. We investigated whether soluble CEA has a role in inhibition of cell differentiation. Materials and Methods: Monolayer cultures of L6, C2C12, Caco-2 and CHO cell lines were grown in dulbecco's modification of eagle's medium (DMEM) containing 10% fetal bovine serum (FBS). For differentiation induction C2C12 and L6 cell lines media, was changed to DMEM containing 2% horse serum. CEA concentration was measured in harvested media by ELISA assay. H&E staining, CK assay and RT-PCR for myogenin gene were used for C2C12 differentiation experiments. Results: The results showed although commercial pure CEA and LS-180 conditioned media (contain high level of CEA) have inhibitory effects on Caco-2 differentiation, but it can also inhibit differentiation of control groups. We observed the effect of high concentration of CEA (5μg/ml) on L6 differentiation is identical with the effect of BSA as control. C2C12 differentiation was inhibited in response to LS-180 conditioned media at morphological level and myogenin expression. CK activity was significantly lower in LS-180 conditioned media (P= 0.0012) and CHO (P= 0.0002) conditioned media groups in comparison to control group. Conclusion: Our finding shows soluble CEA antigen did not have a significant effect on cell differentiation.