ارزيابي فلوسايتومتريك اسپرم گاو بعد از انجماد - يخ گشايي در رقيق كننده مني حاوي اتانول

Folw cytometric evaluation of frozen-thawed bull semen in a semen extender containing ethanol

هدف از انجام اين مطالعه بررسي اثر افزودن اتانول به رقيق كننده بر كيفيت اسپرم گاو بعد از انجماد و يخ گشايي بوده است. در مجموع تعداد 24 انزال از چهار گاو نر (شش انزال از هر گاو طي سه هفته) جمع آوري شد. در هر تكرار، نمونه هاي مني با هم مخلوط و سپس به دو قسمت مساوي تقسيم شده و هريك با يكي از رقيق كننده هاي حاوي تيمارهاي آزمايشي رقيق و منجمد شدند. تيمارهاي مورد استفاده در اين مطالعه شامل: 1) رقيق كننده فاقد اتانول به عنوان گروه شاهد (C) و 2) رقيق كننده حاوي 0/25 درصد اتانول (E) بود. پس از يخ گشايي نمونه ها، فراسنجه هاي كيفي اسپرم شامل جنبايي، يكپارچگي و عملكرد غشاي پلاسمايي، وضعيت زنده ماني و فعاليت ميتوكندري مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج آزمايش حاضر نشان داد كه اسپرم هاي گروه شاهد نسبت به اسپرم هاي گروه اتانول داراي جنبايي كل بالاتر (2/49±76/17 در مقابل 1/96±68/50) و ميزان آپوپتوزيس كم تري (0/36±10/56 در مقابل 0/33±13/13 بودند (0/05>p). هم چنين، در ساير فراسنجه هاي كيفي اسپرم شامل يكپارچگي و عملكرد غشاي پلاسمايي اسپرم و فعاليت ميتوكندري، تفاوتي بين دو گروه شاهد و اتانول مشاهده نشد (0/05>p). نتايج اين مطالعه نشان مي دهد كه اتانول مي تواند اثر منفي بر فراسنجه هاي اسپرم گاو بعد از انجماد و يخ گشايي بگذارد.

The aim of the present study was to investigate the effect of ethanol on bull sperm quality after freeze thawing process. Treatments used in this study included: 1) semen extender without ethanol as control group (C) and 2) semen extender containing 0.25% ethanol (E). A total of 24 ejaculations were collected from four healthy mature Holstein bulls in 3 consecutive weeks and twice a week. In each replicate، semen samples were mixed to eliminate individual differences and then divided into two equal parts and each of them were extended with one of the aforementioned extenders. Afterward the treatments were frozen using a standard protocol. After thawing، sperm motion characteristics، plasma membrane integrity and functionality، apoptosis status and mitochondrial activity were assessed. The result of this study was showed that spermatozoa in control group had higher total motility (68.5±1.96 vs 76.17±2.49) and lower apoptosis (10.65±0.36 vs 13.13±0.33) in comparison with group treated with ethanol (p≤0.05). Also، no differences were observed in plasma membrane integrity and functionality and mitochondrial activity between two treatments (p≥0.05). In conclusion، the results showed that ethanol could negatively affect post thaw characteristics of bull spermatozoa.