بررسي اثر محافظت كنندگي پروتئين هاي نوتركيب VP28 و VP19 يك جدايه ويروس لكه سفيد به روش خوراكي در برابر ويروس بيماري لكه سفيد در ميگوي سفيد غربي

Survey on Protective Effect of Recombinant Proteins VP28 and VP19 of a White Spot Virus Isolate by Food in the White Leg Shrimp against White Spot Disease Virus

ويروس بيماري لكه سفيد يكي از آسيب رسان ترين ويروس ها در پرورش ميگوي جهان و ايران است. پروتئين هاي سطحي اين ويروس در مراحل اوليه برخورد با سلول هاي ميزبان نقش بسيار مهمي دارند و كانديدي براي ساخت واكسن هايزير واحد يا نوتركيب محسوب مي شوند. اين مطالعه به منظور دستيابي به اين پروتئين ها جهت انجام ايمن سازي ميگو وانامي طراحي گرديد. ژنوم ويروس لكه سفيد از ميگوهاي بيمار و داراي علائم باليني مزارع پرورش ميگوي چوئبده آبادان استخراج گرديد. پس از تكثير و خالص سازي، ژن پروتئين هايVP28 وVP19در باكتري TG1 كلون شدند. بيان پروتئين بررسي و پليت هاي تجاري توسط باكتري حاوي پروتئين نوتركيب غيرفعالشده پوشانده شد. پست لاروهاي مرحله 30 ميگوي سفيد غربي با پلت هاي نوتركيب تغذيه شده و در روزهاي 9 و 23 پس از تغذيه، با ويروس لكه سفيد چالش شدند. نتايج آزمايش مواجهه اول نشان داد كه كم ترين درصد تلفات در گروه هاي مختلف مربوط به گروه VP28 برابر 3/84±30% و بالاترين درصد مربوط به گروه TG1 برابر 2/93±72/22% بود. در آزمايش مواجهه دوم كم ترين درصد تلفات مربوط به گروهVP28 5/09±%50و بالاترين درصد مربوط به گروه TG1 2/22±75/55% بود. با توجه به نتايج تحقيق پروتئين نوتركيب VP28 قابليت ايجاد محافظت را در برابر ويروس لكه سفيد دارد درحالي كه پروتئين نوتركيب VP19 قابليت محافظت را نخواهد داشت. هم چنين ميزان بازماندگي ارتباط مستقيم با مدت زمان در اختيار داشتن پروتئين نوتركيب دارد.

White spot disease virus is one of the most deleterious viruses in the world and Iran shrimp farming industry. Surface proteins of virus has important role in the early stages of virus with host cell interaction، because these proteins usually enumerated as a candidate to produce a subunit or recombinant vaccines This study was designed in order to gain these proteins for immunization of white leg shrimp (Litopenaeus vannamei) .White spot virus genome extracted from moribund shrimps with clinical signs of Choebdeh farms. VP28 and VP19 protein-coding gene-specific primers were selected، after amplification and purification were cloned into the E.coli، TG1. Protein expression evaluated and commercial were coated with inactivated bacteria containing the recombinant protein. White leg shrimp post larvaes (PL30) were fed with pellets، then in 9th and 23th day after feeding were challenged by white spot disease virus. The results of the first challenge showed that the lowest mortality in different groups belong to VP28 group with cumulative mortality percent %30 ± 3.84 and the highest percentage of the group TG1 equal to %72.22±2.93، and in the second experiment the lowest cumulative mortality belong to VP28 (%50 ± 5.09) and the highest percentage was owned by group TG1 (%75.55±2.22). Protein VP28 would be able to protect shrimp against the white spot virus، while the VP19 does not have this ability. The survival rate is directly related to the duration of the possession of the recombinant protein.