جداسازي و تعيين هويت مولكولي كمپلكس مايكوباكتريوم توبركلوزيس از جوندگان دامداري هاي آلوده به مايكوباكتريوم

Isolation and Identification of Mycobacterium tuberculosis complex from rodents of infected cattle husbandry

مايكوباكتريوم توبركلوزيس، عامل بيماري سل مي‌باشد كه باعث عوارض و مرگ و مير به ويژه در كشورهاي در حال توسعه است. از اين رو ابزار انگشت‌نگاري DNA براي بهبود تشخيص سل توسعه يافته‌اند و از تكنيك‌هاي تايپينگ مولكولي براي تشخيص و پيگيري گسترش آن استفاده مي‌شود. هدف از اين مطالعه جداسازي مايكوباكتريوم توبركلوزيس از جوندگان دامداري‌هاي آلوده و تعيين هويت آن‌ها مي‌باشد. در مجموع 100 نمونه از جوندگان در دامداري‌هاي آلوده جمع‌آوري شد. در ادامه حضور مايكوباكتريوم به وسيله رشد نمونه‌ها در محيط لوين اشتاين-جانسون مورد بررسي قرار گرفت. همه جدايه‌ها شده توسط روش RFLP و هيبريداسيون DNA شناسايي شدند. هويت جدايه‌ها توسط PCR و آزمون‌هاي 16SrRNA، IS6110 و RD تايپينگ تعيين گرديد. تمايز بيشتر با هضم PvuII و هيبريداسيون DNA با استفاده از پروب توالي‌هاي تكراري چند شكلي غني از سيتوزين/گوانين (PGRS) انجام شد. 5 نمونه حضور مايكوباكتريوم را نشان دادند. نتايج پروب PGRS نشان داد كه دو جدايه متعلق به يك كلاستر هستند، در حالي كه جدايه‌هاي باقي مانده در دسته‌هاي مختلف طبقه‌بندي شدند. تجزيه و تحليل الگوي ژنتيكي به دست آمده و مقايسه اين الگوهاي با الگوي ژنتيكي ساير دامداري‌هاي آلوده و تشابه و تفاوت‌هاي آن‌ها با هم، تاييد انتقال مايكوباكتريوم از جوندگان آلوده به گاوها را در دامداري تاييد مي‌كند. با بررسي نتايج بدست آمده، انتقال مايكوباكتريوم از جوندگان آلوده به گاوها را بايد خطري براي گسترش سويه‌هاي مايكوباكتريوم در بين حيوانات دانست.

Mycobacterium tuberculosis, the agent of tuberculosis, causes morbidity and mortality, particularly in developing countries. Therefore, DNA-fingerprinting tools have been developed to improve tuberculosis case detection and control. Molecular typing techniques allow to detect and follow M. tuberculosis complex. The aim of this work was to isolate and identify M. tuberculosis from rodents in cattle farms contaminated. A total of 100 samples were collected from the rodents in the contaminated farms and analyzed for the presence of Mycobacterium by growing the samples on Lowenstein-Jensen medium. Identity of its were determined by PCR and 16SrRNA, IS6110 and RD typing test. Further differentiation was performed with PvuII digestion and DNA hybridization using the polymorphic guanine/ cytosine-rich repetitive sequences (PGRS) probe. As much as five samples showed the presence of Mycobacterium. The PGRS probe results classified two of the isolates as belonging to one cluster, whereas the remaining isolates were classified as belonging to different clusters. An analysis of the obtained genetic pattern and a comparison of these patterns with the genetic pattern of other infected farms allowed us to record the similarities and difference. The results indicated the transmission of Mycobacterium from infected rodents to the cows located in the same farm. These results highlight the possible danger of transmission of Mycobacterium among animals.