شناسايي پروتئين‌هاي راپتري4(ROP4)و انولاز2 توكسوپلاسما گوندي به عنوان آنتي ژن‌هاي غالب ايمني در گوسفند

Identification of Toxoplasma gondii ROP4 and Enolase2 Proteins as Immunodominant Antigens in Sheep

توكسوپلاسما گوندي (Toxoplasma gondii)، تك ياخته مهم و پاتوژن اجباري درون سلولي است كه در ميزبانان واسط (مهره‌داران خونگرم) ايجاد عفونت توكسوپلاسموزيس حاد و مزمن مي‌نمايد. توكسوپلاسموز مادرزادي در انسان و گوسفند در دوران بارداري منجر به سقط جنين مي‌شود. به منظور تهيه داروهاي شيميايي و توليد واكسن موثر عليه عفونت توكسوپلاسموز و همچنين تهيه ماركرهاي تشخيصي قوي و مناسب براي استفاده در تكنيك‌هاي سرولوژيكي، مولكولي، شناسايي پروتئين‌هاي تاكي زوئيت‌هاي توكسوپلاسما گوندي اهميت زيادي دارد. هدف از انجام اين تحقيق، شناسايي و معرفي پروتئين‌هاي آنتي‌ژنيك و ايمونوژنيك غالب ايمني توكسوپلاسما گونديي در گوسفند با استفاده از تكنيك ايمونوپروتئوميكس بود. براي تهيه تاكي زوئيت‌ها، تعداد 30 سر موش سوري (C57BL/6) ماده بالغ 7-5 هفته به انگل توكسوپلاسما گوندي آلوده شدند. پروتئين‌هاي تاكي‌زوئيت‌ها با روش سونيكاسيون استخراج گرديد. غلظت پروتئين‌ها به روش بردفورد تعيين شد. از 10 راس گوسفند آلوده به توكسوپلاسما گوندي، سرم حاوي آنتي‌بادي ضد توكسوپلاسما تهيه گرديد. مراحل الكتروفورز دوبعدي 2-DE-SDS-PAGE، وسترن بلاتينگ و ايمنوبلاتينگ اجرا شد. با انطباق دادن تصاوير ژل‌هاي 2-DE و ايمنوبلاتينگ، اسپات‌هاي مربوط به پروتئين‌هاي آنتي‌ژنيك و ايمنوژنيك غالب ايمني شناسايي و مورد برش و با روش‌هاي مس اسپكترومتري MS/MS و MALDI-TOF/MS مورد آناليز قرار گرفت و پروتئين‌هاي انولاز 2 و پروتئين راپتري 4 (ROP4) شناسايي شد. اين دو پروتئين مي‌توانند به عنوان ماركر‌هاي تشخيصي در تكنيك‌هاي سرولوژيكي مانند الايزا و نيز در توليد واكسن عليه عفونت توكسوپلاسموز مورد استفاده قرار بگيرند.

Toxoplasma gondii is an important intracellular and obligatory protozoan that causes acute and chronic toxoplasmosis in warm-blooded hosts including sheep and humans. This infection can lead to stillbirth among pregnant women and ewes. Identification and detection of Toxoplasma gondii tachyzoites proteins especially antigenic and immunogenic proteins is crucial and essential for producing efficacious and potent drugs and vaccines against toxoplasmosis, and also for introducing efficient diagnostic markers. The aim of this study was to identify the antigenic and immunodominant immunogenic proteins of Toxoplasma gondii in sheep using immunoproteomic techniques.Thirty C57BL/6 mice (male, 5-7 weekly) were selected for providing Toxoplasma gondii tachyzoites. Proteins of tachyzoites were collected using sonication method and the concentration of the proteins was determined by Bradford method. On the other hand, ovine serum containing anti-Toxoplasma gondii antibodies was collected from 10 infected sheep. Then 2-DE-SDS-PAGE electrophoresis, western blotting and immune blotting techniques were carried out. Finally, it was specified and distinguished the spots which belonged to immunogenic and antigenic proteins on the gels, and the proteins were identified by mass spectrometry (MS/MS, MALDI-TOF/MS). The identified two proteins were enolase 2 and rhoptry protein 4 (ROP4).These immunodominant immunogenic and antigenic proteins have potential of being used as markers in serological diagnostic techniques and they may candidate vaccine against Toxoplasma gondii infection.