بررسي اثر ضد ليشمانيايي عصاره سياه تخمه روي پروماستيگوت هاي ليشمانيا ماژور در شرايط آزمايشگاهي

In vitro Anti Leishmanial Effect of Agrostemma githago Extract on Leishmania Major Promastigotes by Cell Count and MTT Assay

درمان ليشمانيوز به دليل عوارض جانبي متعدد و ايجاد مقاومت دارويي نسبت به داروهايخط اول درمان با پيچيدگي هايي همراه شده است. با توجه به اثر سيتوتوكسيك و ضد سرطاني عصارهسياه تخمه، اين مطالعه با هدف ارزيابي اثرات ضد ليشمانيايي با استفاده از روش رنگ سنجي mtt 3 4,5 dimethylthiazol2yl 2,5 diphenyltetrazolium bromide و شمارش سلولي انجام گرفت.مواد و روش ها: تعداد 106 ×2.5 پروماستيگوت ليشمانيا ماژور در فاز ايستا به هر چاهك از پليت هاي 96 خانه اضافه شد. عصاره سياه تخمه در رقت هاي افزايشي (2.4 - 0.05 ميلي گرم بر ميلي ليتر) به چاهك ها افزوده و به مدت 48 ساعت در دماي 25 درجه سانتي گراد انكوبه شد. از داروي گلوكانتيم به عنوان كنترل استفاده شد. پس از سانتريفيوژ، محلول رويي خارج و50 ميكروليتر mtt اضافه گرديد. بعد از سه ساعت انكوباسيون، محلول رويي جدا و حلال dmso افزوده شد. جذب نوري با دستگاه اليزا ريدر قرائت گرديد. از روش رنگ آميزي تريپان بلو براي ارزيابي اثر عصاره سياه تخمه روي پروماستيگوت هاي ليشمانيا ماژور استفاده گرديد.يافته ها: عصاره سياه تخمه به صورت وابسته به دوز باعث كاهش درصد زنده ماني پروماستيگوت هاي ليشمانيا ماژور شد كه در مقايسه با گروه كنترل تفاوت آماري معني دار داشت (p<0/05). در روش mtt، ic50 عصاره بر روي پروماستيگوت هاي انگل ليشمانيا ماژور 0.365 و گلوكانتيم 71.01 ميلي گرم در ميلي ليتر به دست آمد.استنتاج: عصاره آبي سياه تخمه نسبت به گلوكانتيم تاثير بسيار قوي تري روي اشكال پروماستيگوت ليشمانيا ماژور دارد.

Background and purpose: Treatment of leishmaniasis is getting complicated due to multiple side effects and drug resistance to first-line drugs. Agrostemma githago is a plant with anti-cancer and cytocidal effects, so, this study was conducted to evaluate the anti leishmanial effect of its extract on Leishmania major promastigotes by MTT assay and cell count. Materials and methods: A total of 2.5×106 Leishmania major promastigotes in their stationary phase were plated to each well of the 96 well culture plates. Cells were then incubated with increasing concentrations of Agrostemma githago extract (0.05 – 2.4 mg/ml) for 48 hours at 25°C. Glucantim was used as standard control. Then, the supernatants were discarded and 50 μl of MTT were added for 3 hours. After centrifuge, the supernatants were replaced by 100 μl of DMSO. The plate was read by ELISA reader at 570 nm. Trypan blue staining was also performed to evaluate the effect of Agrostemma githago extract on Leishmania major promastigotes. Results: MTT assay showed that increasing concentrations of Agrostemma extract could significantly reduce cell viability of Leishmania major promastigots in a dose dependent manner (p<0.05). IC50 of the Agrostemma and Glucantime were 0.365 and 71.01 mg/ml, respectively. Conclusion: Aqueous extract of Agrostemma githago was found to have stronger inhibitory effect than Glucantim on Leishmania major promastigots